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申请/专利权人：中国科学院南海海洋研究所;广东金阳生物技术有限公司

摘要：本发明公开了一种凡纳滨对虾抗肝肠孢虫性状育种材料筛选方法，包括了对虾群体家系收集、对虾群体家系抗EHP表型性状测试、候选群体家系EHP人工模拟感染、候选群体家系对虾个体第一轮筛选、候选群体家系对虾个体第二轮筛选、候选群体家系对虾个体第三轮筛选等6个筛选环节，最终获得具有抗肝肠孢虫性状对虾育种材料，本方法将育种材料筛选的重点由筛选群体家系转变为筛选对虾个体，最终群体家系中个体的淘汰率达到95％以上，大幅提高了抗EHP性状育种材料筛选的精准度。

主权项：1.一种凡纳滨对虾抗肝肠孢虫性状育种材料筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1对虾群体收集：收集不同来源的对虾群体；2对虾群体抗EHP表型性状测试：S1、随机抽样：每个群体随机抽取50-150尾平均体长2-4cm的对虾进行抗EHP性状测试；S2、EHP悬液制备：取EHP检测强阳性对虾3-6尾，取对虾肝胰腺和肠道，进行匀浆，匀浆液按1:500体积比加入灭菌海水，混匀，即为EHP悬液；S3、EHP感染：EHP悬液以1％vw的比例混入对虾饲料并进行粘合，稍晾干后，投喂实验对虾，连续投喂14天，投喂量按正常养殖的投饲量；同时，各组实验桶内加入EHP感染强阳性且平均体长7-10cm的活虾2-4尾；S4、EHP感染第一次检测：第14天后，移除加入的EHP强阳性活虾，收集每个群体的所有实验对虾样品，取肝胰腺，提取DNA进行EHPPCR检测；S5、抗EHP性状评估：根据抽样样品EHP感染检测结果统计各个实验群体的感染率，根据感染率的大小对群体的抗EHP性状进行排序，取最低感染率的群体作为候选群体；3候选群体EHP人工模拟感染：取候选群体平均体长3-5cm的对虾10000-30000尾于筛选池，按照步骤2中S2和S3的方法进行EHP悬液的制备，饲喂感染和共栖感染，连续投喂和共栖14天；其中，共栖感染中，筛选池加入EHP感染强阳性且平均体长7-10cm的活虾10-20尾，整个人工模拟感染实验过程均不清除加入的EHP感染强阳性的活虾；4候选群体对虾个体第一轮筛选：第14天后停止投喂含EHP的饲料，进行正常的饲喂和管理，养殖过程中及时清除死虾，以免污染水质；5候选群体中对虾个体第二轮筛选：经上述第一轮筛选淘汰后的对虾继续养殖至第30天后，淘汰掉50％生长缓慢和外表观测不健康的个体；6候选群体中对虾个体第三轮筛选：S1、对虾选择及分装暂养：经上述第二轮筛选淘汰后的对虾继续养殖至第50天后，取个体大、肝胰腺和肠线清晰且具有活力的对虾，每尾单独置于装有10-15升清洁海水的小型塑料箱中；S2、EHP感染第二次检测：逐尾进行上述对虾的无损伤肛拭子取样和EHP感染的定量PCR检测；S3、EHP阴性对虾消毒处理：将筛选出EHP检测阴性的对虾消毒后移入候选亲虾培育池，由此获得抗肝肠孢虫性状的凡纳滨对虾育种材料，继续进行后期的培育。

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