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申请/专利权人：吉林大学

摘要：一种靶向PD‑L1基因的脱氧核酶、靶向递送载体、肿瘤靶向型纳米复合物其在制备治疗黑色素瘤药物的应用，属于生物技术领域。本发明首先设计筛选出具有高效靶基因识别和切割活性的脱氧核酶Dz1～Dz10，再制备得到具有肿瘤靶向性的脱氧核酶递送载体APFP，将APFP与脱氧核酶进行静电组装制备APFPDz1～Dz10纳米复合物。本发明实现了对脱氧核酶的肿瘤细胞靶向递送，显著抑制肿瘤细胞PD‑L1的表达，成功激活了CD8+T细胞的肿瘤杀伤活性，从而延缓了小鼠转移性黑色素瘤的进展，为黑色素瘤免疫治疗提供了新的策略和设计思路，具有良好的临床应用前景。

主权项：1.一种担载脱氧核酶分子的肿瘤靶向型纳米复合物，其是由如下步骤所述方法制备得到：（1）将45~55mgPAMAM和50~60mg七氟丁酸酐溶解于6~10mL甲醇中，在室温下搅拌36~50h，然后置于截留分子量为3000~4000Da的透析袋中，在去离子水中透析48~72h，袋内的透析产物冷冻干燥过夜，得到氟化修饰PAMAM载体粉末；（2）取50~60mg步骤（1）得到的氟化修饰PAMAM载体粉末溶解于2~4mLPBS溶液中，得到溶液A；另取70~80mg的马来酰亚胺-聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯Mal-PEG5000-NHS溶解于2~4mL的PBS溶液中，得到溶液B；混合溶液A和溶液B，室温下搅拌36~50h，然后置于截留分子量为7000~9000Da的透析袋中，在去离子水中透析48~72h，袋内的透析产物过夜冷冻干燥，得到Mal-PEG5000-FP粉末；（3）将OD260为15~30的巯基化适配体AS1411溶解于4~6mLPBS溶液中，并加入终浓度为8~12mM的三2-羧乙基膦，然后于室温下搅拌1~2h，得到溶液C；取40~50mg步骤（2）得到的Mal-PEG5000-FP粉末溶解于4~6mLPBS溶液中，得到溶液D；混合溶液C和溶液D，室温下搅拌20~30h，然后置于截留分子量为7000~9000Da的透析袋中，在去离子水中透析48~72h，袋内的透析产物冷冻干燥过夜，得到的树枝状高分子衍生物即肿瘤靶向递送载体AS1411-PEG-FP粉末；（4）将核苷酸序列如SEQIDNO.4所示的靶向PD-L1基因的脱氧核酶分子与步骤（3）得到的肿瘤靶向递送载体AS1411-PEG-FP粉末以1：20~100的质量比例溶于无核酸酶水中并混匀，然后在0~40°C下孵育20~40min，即得到担载脱氧核酶分子的肿瘤靶向型纳米复合物。

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