申请/专利权人：湖南祥民制药有限公司

申请日：2017-06-14

公开（公告）日：2017-11-24

公开（公告）号：CN107371672A

主分类号：A01G1/00(2006.01)I

分类号：A01G1/00(2006.01)I;A01G7/06(2006.01)I;C07H15/256(2006.01)I;C07H1/08(2006.01)I

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2021.03.26#发明专利申请公布后的驳回;2017.12.19#实质审查的生效;2017.11.24#公开

摘要：本发明公开了一种提高甜叶菊REB‑D得率的方法，主要是通过甜叶菊的栽培及甜菊糖苷提取方法这两个方面来实现的，其中在甜叶菊的栽培中，需要在甜叶菊收割前2个月，喷施包括轻稀土元素0.01‑0.05份、光合菌0.1‑0.2份、盐5‑8份、螯合钾15‑25份以重量份计的调节剂来刺激甜叶菊叶面，每5‑7天喷施一次，每次喷施的量以叶面湿润为准。与现有技术相比，本发明使莱鲍迪苷D的含量在以往的基础上提高2‑5倍；2、采用两种酶解、加热煮沸，加快了甜菊糖苷从甜叶菊叶片中的释放速率，也免去了溶剂乙醇的使用，加快了甜菊糖苷的提取速率。

主权项：一种提高甜叶菊REB‑D得率的方法，其特征在于，是通过以下几个方面来实现的：（1）甜叶菊的栽培：在甜叶菊收割前2个月，喷施包括轻稀土元素0.01‑0.05份、光合菌0.1‑0.2份、盐5‑8份、螯合钾15‑25份以重量份计的调节剂来刺激甜叶菊叶面，每5‑7天喷施一次，每次喷施的量以叶面湿润为准；（2）甜菊糖苷的提取：a、叶片粉碎至200‑300目；b、加适量水混合后，加酶水解，所用酶为纤维素酶及中性蛋白酶两种酶，其中纤维素酶的添加量为底物的2%‑3%，适宜温度为40℃，pH为4.5‑6.5，活力为10万单位每克，作用时间1‑1.5h；中性蛋白酶的添加量为0.05%‑0.25%，适宜温度为35‑55℃，pH值为6‑6.8，活力为10万单位每克，作用时间为0.5‑0.8h；然后加热煮沸，维持煮沸状态1‑2h，过滤得提取液、滤渣，其中滤渣重复加热煮沸1‑3次，收集全部的滤液，得总提取液；c、将质量分数为20‑30%的三氯化铁溶液与总提取液按照5‑10:1‑3:50‑80的体积比混合均匀，并用氢氧化钙调节pH值至7‑7.5，并加热至40‑50℃，保温10‑25min，然后冷却至室温，得混合液；d、用经过预处理的HPD‑392大孔吸附树脂纯化步骤c得到的混合液，树脂吸附时的流速为3‑5BVh，吸附饱和后用乙醇溶液洗脱，洗脱的速度为4‑6BVh，得洗脱液；e、采用微孔膜再次过滤步骤d得到的洗脱液，然后采用药用脱色用氧化铝进行脱色，流速为22.0‑25.0mLmin，同时加温至40‑45℃，最后经过滤、浓缩、干燥得到甜菊糖苷。

全文数据：一种提高甜叶菊REB-D得率的方法技术领域[0001]本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种提高甜叶菊REB—D得率的方法。背景技术[0002]甜叶菊叶片中的甜味成分统称为甜菊糖苷，为一类四环二萜类衍生物，包含但不限于甜菊苷，莱鲍迪苷八、8、：、0，并以小浓度存在甜叶菊的叶子中。其甜度约为蔗糖的300倍，研宄表明，甜菊糖苷具有高甜度、低热量、无明显毒副作用的特点，可抑制高血糖、高血压，并由消炎、抗肿瘤、止泻利尿以及协助免疫调节的作用。为了方便，莱鲍迪苷在本文中称为REB-A、REB-B、REB-C、REB-D等，在莱鲍迪苷中，REB-D具有比REB-A具有更好的糖特征和更理想的味道。[0003]关于REB的提取，现有技术中一般是通过将甜叶菊叶粉碎、提取、过滤、吸附分离、浓缩、沉淀等工序来实现的，在实际的提取过程中，REB-D是混合着其他莱鲍迪苷一起被提取出来的。但因甜叶菊植物本身的REB含量限制，加上工艺处理方面的不佳，现有技术中提取到的甜菊糖苷总含量不高，尤其是REB-D的含量，而且提取成本高。发明内容[0004]针对上述现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种提高甜叶菊REB-D得率的方法，该方法更适应于工业化生产。[0005]为实现上述目的，本发明采用的技术方案是:一种提高甜叶菊REB-D得率的方法，是通过以下几个方面来实现的：1甜叶菊的栽培:在甜叶菊收割前2个月，喷施包括轻稀土元素0•01-〇.05份、光合菌0.1-0.2份、盐5_8份、螯合钾15_25份以重量份计的调节剂来刺激甜叶菊叶面，每5-7天喷施一次，每次喷施的量以叶面湿润为准；2甜菊糖苷的提取:a、叶片粉碎至200-300目；b、加适量水混合后，加酶水解，所用酶为纤维素酶及中性蛋白酶两种酶，其中纤维素酶的添加量为底物的2%-3%，适宜温度为40°C，pH为4•5-6•5，活力为10万单位每克，作用时间1-1•5h;中性蛋白酶的添加量为〇.〇5%-0.25%，适宜温度为35_55°C，pH值为6_6.8,活力为10万单位每克，作用时间为〇.5-〇.8h;然后加热煮沸，维持煮沸状态l_2h，过滤得提取液、滤渣，其中滤渣重复加热煮沸1-3次，收集全部的滤液，得总提取液;c、将质量分数为20-30%的三氯化铁溶液与总提取液按照5-10:1-3:50-80的体积比混合均匀，并用氢氧化钙调节pH值至7-7.5,并加热至40-5TC，保温10-25min，然后冷却至室温，得混合液;d、用经过预处理的HPD-392大孔吸附树脂纯化步骤c得到的混合液，树脂吸附时的流速为3_5BVh，吸附饱和后用乙醇溶液洗脱，洗脱的速度为4-6BVh，得洗脱液;e、采用微孔膜再次过滤步骤d得到的洗脱液，然后采用药用脱色用氧化铝进行脱色，流速为22•0-25•OmLmin，同时加温至40-45°C，最后经过滤、浓缩、干燥得到甜菊糖苷。[0006]优选地，上述调节剂还包括油菜素内酯〇•5-2份。[0007]优选地，上述调节剂在每次喷施前采用〇-rc的水4〇-so份溶解。[0008]优选地，水解的同时加超声波，超声波的频率为5〇KHZ。[0009]与现有技术相比，本发明的有益效果是：1、栽培时采用调节剂刺激叶面，使莱鲍迪苷D的含量在以往的基础上提高2_5倍;2、采用两种酶解、加热煮沸，加快了甜菊糖苷从甜叶菊叶片中的释放速率，也免去了溶剂乙醇的使用，加快了甜菊糖苷的提取速率;3、采用大孔树脂吸附、微孔膜过滤及氧化铝脱色，可使甜菊糖苷的得率达到99•7%以上，成本降低76%。具体实施方式[0010]现结合具体实施例，来对本发明作进一步的详细描述。显然，不能因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，均应属于本发明的保护范围。下述实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。[0011]实施例一提高甜叶菊REB-D得率的方法，是通过以下几个方面来实现的：1甜叶菊的栽培:在甜叶菊收割前2个月，喷施包括轻稀土元素〇•〇5份、光合菌0•2份、盐8份、螯合钾25份以重量份计的调节剂来刺激甜叶菊叶面，每5天喷施一次，每次喷施的量以叶面湿润为准;在每次喷施前采用1°C的水50份溶解。[0012]2甜菊糖苷的提取:a、叶片粉碎至200目；b、加适量水混合后，加酶水解，所用酶为纤维素酶及中性蛋白酶两种酶，其中纤维素酶的添加量为底物的3%，适宜温度为40°C，pH为4.5,活力为10万单位每克，作用时间lh;中性蛋白酶的添加量为0.05%，适宜温度为55°C，pH值为6，活力为10万单位每克，作用时间为0.8h;然后加热煮沸，维持煮沸状态2h，过滤得提取液、滤渣，其中滤渣重复加热煮沸3次，收集全部的滤液，得总提取液;c、将质量分数为30%的三氯化铁溶液与总提取液按照10:1:50的体积比混合均匀，并用氢氧化钙调节pH值至7,并加热至50°C，保温lOmin，然后冷却至室温，得混合液;d、用经过预处理的HPD-392大孔吸附树脂纯化步骤c得到的混合液，树脂吸附时的流速为3BVh，吸附饱和后用乙醇溶液洗脱，洗脱的速度为4BVh，得洗脱液;e、采用微孔膜再次过滤步骤d得到的洗脱液，然后采用药用脱色用氧化铝进行脱色，流速为23.0mLmin，同时加温至45°C，最后经过滤、浓缩、千燥得到甜菊糖苷。[0013]实施例二提高甜叶菊REB-D得率的方法，是通过以下几个方面来实现的：1甜叶菊的栽培:在甜叶菊收割前2个月，喷施包括轻稀土元素0.01份、光合菌〇.1份、盐5份、螯合钾15份、油菜素内酯0.5份以重量份计的调节剂来刺激甜叶菊叶面，每7天喷施一次，每次喷施的量以叶面湿润为准；2甜菊糖苷的提取:a、叶片粉碎至300目；b、加适量水混合后，加酶水解，水解的同时加超声波，超声波的频率为50KHZ，所用酶为纤维素酶及中性蛋白酶两种酶，其中纤维素酶的添加量为底物的2%，适宜温度为4TC，pH为6•5，活力为10万单位每克，作用时间1_5h;中性蛋白酶的添加量为0.25%，适宜温度为35°C，pH值为6.8,活力为10万单位每克，作用时间为O.Sh;然后加热煮沸，维持煮沸状态lh，过滤得提取液、滤渣，其中滤渣重复加热煮沸卜3次，收集全部的滤液，得总提取液;c、将质量分数为20%的三氯化铁溶液与总提取液按照5:3:80的体积比混合均匀，并用氧氧化转调节pH值至7.5，并加热至40°C，保温25min，然后冷却至室温，得混合液;d、用经过预处理的HPD_392大孔吸附树脂纯化步骤c得到的混合液，树脂吸附时的流速为5BVh，吸附饱和后用乙醇溶液洗脱，洗脱的速度为6BVh，得洗脱液;e、采用微孔膜再次过滤步骤d得到的洗脱液，然后采用药用脱色用氧化铝进行脱色，流速为25•OmLmin，同时加温至4TC，最后经过滤、浓缩、干燥得到甜菊糖苷。

权利要求：l.一种提高甜叶菊REB-d得率的方法，其特征在于，是通过以下几个方面来实现的：1甜叶菊的栽培:在甜叶菊收割前2个月，喷施包括轻稀土元素〇.01-0.05份、光合菌0.1-0.2份、盐5-8份、螯合钾15-25份以重量份计的调节剂来刺激甜叶菊叶面，每5-7天喷施一次，每次喷施的量以叶面湿润为准；2甜菊糖苷的提取:a、叶片粉碎至200-300目；b、加适量水混合后，加酶水解，所用酶为纤维素酶及中性蛋白酶两种酶，其中纤维素酶的添加量为底物的2%-3%，适宜温度为40。：，pH为4.5-6.5,活力为10万单位每克，作用时间5h;中性蛋白酶的添加量为0.05%-0.25%，适宜温度为35-55°C，pH值为6_6.8,活力为10万单位每克，作用时间为0.5-0.8h;然后加热煮沸，维持煮沸状态l_2h，过滤得提取液、滤渣，其中滤渣重复加热煮沸1-3次，收集全部的滤液，得总提取液;c、将质量分数为2〇_30%的三氯化铁溶液与总提取液按照5-10:1-3:5〇-80的体积比混合均匀，并用氢氧化钙调节pH值至7-7•5，并加热至40-50°C，保温10-25min，然后冷却至室温，得混合液;d、用经过预处理的HPD_392大孔吸附树脂纯化步骤c得到的混合液，树脂吸附时的流速为3-5BVh，吸附饱和后用乙醇溶液洗脱，洗脱的速度为4-6BVh，得洗脱液;e、采用微孔膜再次过滤步骤d得到的洗脱液，然后采用药用脱色用氧化铝进行脱色，流速为22.〇_25•OmLmin，同时加温至4〇-45°C，最后经过滤、浓缩、千燥得到甜菊糖苷。2.根据权利要求1所述的提高甜叶菊REB-D得率的方法，其特征在于，上述调节剂还包括油菜素内酯0.5-2份。一3•根据权利要求1或2臟的提局甜叶菊REB-D得率的方法，上述调节剂在每次喷施前采用0-1°C的水40-50份溶解。、

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