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申请/专利权人：伊莱利利公司

摘要：本发明涉及医学领域。更具体地，本发明涉及通过激动GFRAL受体来治疗糖尿病或肥胖症的方法，用于这种治疗中的化合物和含有这种化合物的药物组合物。本发明还涉及通过拮抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体来治疗恶病质的方法，用于这种治疗中的化合物和含有这种化合物的药物组合物。

主权项：1.降低哺乳动物中的血糖的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的激动GFRAL受体的化合物。

全文数据：GFRAL受体疗法[0001]本发明涉及医学领域。更具体地，本发明涉及通过激动GFRAL受体来治疗糖尿病或肥胖症的方法，用于这种治疗中的化合物和含有这种化合物的药物组合物。本发明还涉及通过拮抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体来治疗恶病质的方法，用于这种治疗中的化合物和含有这种化合物的药物组合物。[0002]GDF15属于转化生长因子-MTGFP超家族。在GDF15的许多报道的生物学功能中，能量内稳态的调节可能由于其在治疗肥胖症和代谢疾病中的潜力而是重要的。GDF15和体重之间的联系最初基于具有晚期前列腺癌的个体中的升高的血清GDF15水平和重量减轻之间的相关性的观察结果。此外，GDF15在动物模型中的过表达导致瘦表型、食欲减退和代谢参数的改善。己经报道，GDF15通过作用于下丘脑和脑干来调节食物摄入和体重。然而，GDF15的作用机制尚未在分子水平上被理解，并且迄今尚未鉴定到GDF15的受体。[0003]申请人已经发现，GDF15以高亲和力与GFRa受体家族的远端成员GFRALGDNF受体a样）（其为具有单个跨膜结构域且没有已知配体的膜蛋白）结合。GFRAL是胶质细胞系来源的神经营养因子GDNF受体家族的成员。GDNF家族配体属于半胱氨酸结蛋白家族并且作为同源二聚体发挥功能。与经典的TGF-P超家族成员不同，所有GDNF家族配体都通过RET受体和GDNF家族受体-a之间的复合物信号传递。GFRa受体是具有糖基磷脂酰肌醇GPI锚的质膜蛋白。已经表征了四种不同的GFRa受体GFRa1-4并且己经确定了它们的配体特异性。GDNF结合GFRa1，NRTN结合GFRa2，ARTN结合GFRa3，且PSPN结合GFRa4。有趣的是，己经基于序列同源性鉴定了GFRa受体的两种远端同源物GFRAL和Gasl生长停滞特异性1。它们的配体迄今未知。[0004]GFRAL是GFRa家族的远端同源物，并且其与GFRa-330%同一性）比其与GFRa-1、-2或-4更密切相关。GFRAL和GFRa家族的其他成员之间的一个区别是GFRAL缺乏C端GPI锚定基序。相反，预测GFRAL是具有单个跨膜结构域的膜蛋白。[0005]申请人在本文中公开了⑶F15对动物模型中的体重、食物摄入和葡萄糖参数的影响需要GFRAL受体。在纯合GFRAL缺陷小鼠中不存在重组GDF15降低血糖和体重的效力。这些数据提供了明确的证据来支持GFRAL作为GDF15受体。该发现是用于开发与GFRAL受体相互作用以治疗糖尿病、肥胖症和恶病质中的一种或多种的新化合物的基础。[0006]本文所述的发明提供了用化合物调节GDF15和GFRAL活性包括激动、拮抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体的方法。所述化合物可以包含以比GDF15更大的亲和力结合GFRAL受体且阻断GDF15结合GFRAL受体的抗体。本发明还包括在哺乳动物中降低血糖和降低体重的方法，其包括施用化合物或药物组合物以激动GFRAL受体。本发明还包括在哺乳动物中增加哺血糖和增加体重的方法，其包括施用化合物或药物组合物以拮抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体。[0007]本发明包括降低哺乳动物中的血糖的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的激动GFRAL受体的化合物。本发明还包括增加哺乳动物中的血糖的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的拮抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体的化合物。此外，本发明包括降低哺乳动物中的体重的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的激动GFRAL受体的化合物。本发明还包括增加哺乳动物中的体重的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的拮抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体的化合物。[0008]本发明包括前述方法，其中所述化合物通过抑制GDF15的结合来阻断GFRAL受体，且其中所述化合物包含抗体或其片段。本发明还包括前述方法，其中所述哺乳动物是人，且所述6?1^受体具有8£〇10冊:4的氨基酸序列，且所述〇0?15具有5£〇10腸:2的氨基酸序列。本发明还包括前述方法，其中所述哺乳动物是小鼠，且其中所述GFRAL受体具有SEQIDNO:9的氨基酸序列，且所述GDF15具有SEQIDNO:7的氨基酸序列。[0009]本发明包括前述方法，其中所述化合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂一起施用，且其中所述化合物与GLP-1、胰岛素、胰岛素类似物、DPP-4抑制剂、SGLT2抑制剂和胰尚血糖素中的一种或多种一起施用。[0010]本发明包括药物组合物，其包含激动GFRAL受体的化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。本发明还包括药物组合物，其包含拮抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体的化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。本发明还包括前述组合物，其还包含GLP-1、胰岛素、胰岛素类似物、DPP-4抑制剂、SGLT2抑制剂和胰高血糖素中的一种或多种。本发明还包括前述组合物，其中将所述化合物和GLP-1、胰岛素、胰岛素类似物、DPP-4抑制剂、SGLT2抑制剂和胰高血糖素中的一种或多种融合。[0011]本发明包括分离的化合物，其激动GFRAL受体。本发明还包括分离的化合物，其拮抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体。本发明还包括前述化合物，其中所述化合物是肽、蛋白、抗体或其片段。本发明还包括前述化合物，其中所述抗体或其片段与GDF15结合GFRAL上的相同表位或氨基酸区域。[0012]本发明包括治疗哺乳动物中的糖尿病的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的激动GFRAL受体的化合物。本发明还包括治疗哺乳动物中的肥胖症的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的激动GFRAL受体的化合物。本发明还包括治疗哺乳动物中的恶病质的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的拮抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体的化合物。[0013]本发明包括蛋白，其包含a不溶性人GFRAL受体的结合GDF15的可溶性片段，其中所述不溶性人GFRAL受体特异性结合人GDF15,和⑹人免疫球蛋白IgG重链的恒定区的除了所述恒定区的第一个结构域之外的所有结构域;其中所述蛋白特异性结合人GDF15。本发明还包括前述蛋白，其中所述不溶性人GFRAL受体包含SEQIDN0:4。本发明还包括前述蛋白，其中所述蛋白基本上由以下组成:不溶性人GFRAL受体的细胞外区域和人igGl免疫球蛋白重链的恒定区的除了所述恒定区的第一个结构域之外的所有结构域。[00M]对于本发明，“抗体”是指动物抗体、人源化抗体或人抗体的完整的抗体包含完全或全长Fc区），基本上完整的抗体，或包含抗原结合区的抗体的部分或片段，例如Fab片段、Fab’片段或Fab’）2片段。如本文所用的术语“单克隆抗体”是指来自基本上均质的抗体群体的抗体，即构成群体的单独抗体是相同的和或结合相同的表位，除了可能在单克隆抗体的产生期间产生的可能变体，诸如通常以少量存在的变体。这种单克隆抗体通常包括包含结合靶标的多肽序列的抗体，其中通过包括从多种多肽序列中选择单个靶标结合多肽序列的方法获得靶标结合多肽序列。例如，选择方法可以是从多种克隆诸如杂交瘤克隆、噬菌体克隆或重组DNA克隆的合并物中选择独特克隆。应当理解，可进一步改变选择的粑标结合序列，例如以改善对靶标的亲和力，将靶标结合序列人源化，改善其在细胞培养物中的产生，降低其在体内的免疫原性，产生多特异性抗体等，而且包含改变的靶标结合序列的抗体也是本发明的单克隆抗体。与通常包括针对不同决定簇表位的不同抗体的多克隆抗体制备物相反，单克隆抗体制备物的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除了它们的特异性以外，单克隆抗体制备物的优势在于它们通常未被其它免疫球蛋白污染。修饰语“单克隆”表示抗体的特征是从基本上均质的抗体群体获得的，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，待根据本发明使用的单克隆抗体可以通过本领域己知的各种技术制备，包括杂交瘤方法、重组DNA方法和噬菌体展示技术中的一种或多种。[0015]单克隆抗体在本文中具体包括“嵌合”抗体免疫球蛋白），其中重链和或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体以及此类抗体的片段中的相应序列相同或同源，只要它们表现出期望的生物学活性。制备嵌合抗体的方法是本领域已知的。[0016]本领域众所周知，用于治疗糖尿病和或肥胖症的药剂可以与其他用于治疗糖尿病和或肥胖症的药剂组合。本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以与糖尿病或肥胖症的其他有效治疗包括但不限于GLP-1、胰岛素、胰岛素类似物、DPP-4抑制剂、SGLT2抑制剂和胰高血糖素）同时或依次共同施用。单独或与其它有效治疗组合的本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以遵循批准的医疗程序诸如减肥外科手术，例如胃旁路手术或可调节胃捆扎手术同时或依次施用。[0017]通过免疫共沉淀测定法测试GDF15与一组GFRa受体相关蛋白的相互作用。三种受体0?1^4、0?1^1规〇10.腸:4和031是？1^1^-标记的并且在冊1293细胞中瞬时过表达。FLAG™，Sigma-Aldrich的注册商标，是可以添加至蛋白中的标签，其具有序列基序Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys。收获细胞裂解物并在与抗FLAG™抗体免疫沉淀之前与GDF15-串联Fc融合重组蛋白一起孵育。尽管所有三种蛋白都被表达和免疫沉淀，但GDF15SEQID.N0:2_串联Fc仅在GFRAL存在的情况下免疫共沉淀（图1，表明GFRAL和GDF15之间的直接相互作用。[0018]为了提供GFRAL和GDF15之间相互作用的更多证据并更好地理解相互作用的特异性，表达GFRALSEQID.N0:4的细胞外结构域（“ECD”）的重组蛋白，并纯化以开发固相测定以生成相对结合亲和力的更定量测量。利用重组天然GDNF蛋白作为该测定中的阳性对照，并且其结合经典GFRa受体，且与GFRa1的相互作用最强（图2AADNF和GFRAL或Gas1之间未观察到相互作用。相反，天然GDF15SEQID.N0:2强烈结合GFRAL的ECD，但不识别任何其他受体图2B。这些结果表明GFRAL和⑶F15之间的相互作用是选择性和特异性的。[0019]SPR光谱术用于评价GFRALSEQID.N0:4和GDF15SEQID.N0:2之间的亲和力。经由胺偶联将纯化的GFRAL的重组ECD固定化在GELifeSciencesCM5芯片上。在流动相中递送各种浓度的重组GDF15蛋白（图3。将六个数据集拟合至二价分析模型，并计算蛋白的亲和力KD。天然重组GDF15和GFRAL的ECD之间的亲和力为〜0.7nM。[0020]动物模型用于证实GDF15的生物学功能需要GFRAL。从TaconicBiosciences，Inc.获取具有GFRAL的全身缺失的小鼠用于该测试。纯合的GFRAL敲除小鼠是活的并且没有严重的异常。雄性纯合敲除小鼠重量小于野生型性别匹配的同窝小鼠，而在雌性K0和野生型同窝小鼠之间没有观察到显著的体重差异。[0021]用GDF15治疗小鼠抑制食物摄入和重量增加且改善葡萄糖参数。为了确定这些作用是否需要GFRAL，我们用重组串联FcGDF15SEQID.N0:2蛋白以0.1mgkg剂量注射野生型和纯合敲除小鼠I3天，每两天一次。野生型（“WT”）动物表现出持续的重量减轻并显著减少食物摄入（图4。我们还检查了⑶F15在葡萄糖内稳态中的作用。GDF15导致WT小鼠中基线葡萄糖水平的显著降低（图4。在研宄结束时的口服葡萄糖耐量测试0GTT期间，与媒介物治疗组相比，用GDF15治疗的WT动物具有降低的血糖漂移图4。[0022]然而，GFRAL敲除群组中不存在GDF15对体重、食物摄入和葡萄糖参数的影响（图4。对GFRAL敲除小鼠没有影响的⑶H5治疗证实了我们的假设:GFRAL是介导GDF15的生物学活性的内源GDF15受体。该方法还可用于通过测量具有GFRAL受体的WT动物中与用GDF15处理的相同类型动物相比的对食物摄入、体重增加和葡萄糖的影响来鉴定潜在的治疗有效的GFRAL激动剂抗体或蛋白。[0023]生成GFRAL抗体。用从暴露于SEQIDN0:11的重组蛋白抗原的小鼠产生的小鼠杂交瘤产生针对小鼠GFRAL的六种小鼠单克隆抗体。选择六种所得抗体以测试它们干扰GDF15结合的能力。两种抗体8A2和8G2剂量依赖性地抑制GDF15和GFRAL之间的结合（图5。这两种抗体结合人和小鼠GFRAL受体。其他四种抗体7F10、5E1、6F10和2H8仅结合小鼠GFRAL受体。[0024]人和小鼠GDF15氨基酸序列下面分别作为SEQIDNO:1和6给出。必须从全长蛋白切下这些序列的前结构域，以生成活性GDF15分子。活性GDF15分子氨基酸序列下面作为SEQIDN0:2人GDF15和SEQIDN0:7小鼠GDH5给出。[0025]附图说明：图1•免疫共沉淀测定显示GFRAL与GDF15相互作用。从用FLAG™标记的GFRa4、GFRAL或GAS1瞬时转染HEK293细胞制备细胞裂解物，并与重组串联FC-GDF15蛋白一起孵育。使用抗FLAG™抗体进行免疫沉淀，随后用抗FLAG™和抗Fc抗体进行免疫印迹。[0026]图2•固相结合测定显示A重组GDNF蛋白最强烈地结合GFRal，且⑻重组GDF15与GFRAL的ECD特异性结合。[0027]图3•表面等离子体共振（“SPR”）传感图显示GDF15SEQID.N0:2和GFRAL的E⑶（SEQID.N0:4之间的结合。在25°C下研究GFRAL的重组ECD与㈧天然GDF15和⑻串联Fc-GDFl5之间的结合。将生物传感器芯片响应绘制为时间的函数。[0028]图4•显示具有和不具有GFRAL受体（SEQIDN0.9的小鼠中⑶F15SEQIDN0.7的影响。显示在正常饲料喂养的10周龄野生型或Gfral--K0小鼠（对于野生型，n=9;对于K0，n=8中，用GDF15治疗期间对㈧体重、⑻食物摄入和⑹饲喂血糖水平的影响，⑼在雄性小鼠中13天GDF15治疗后的口服葡萄糖耐量测试0GTT且E-H是雌性小鼠中的相同的分别测试。[0029]图5•测试抗体以确定它们是否阻断GDF15和GFRAL之间的相互作用。在生成的不同GFRAL抗体存在的情况下，通过固相结合测定评价GDR5SEQID.N0:2和GFRALSEQID.NO:9之间的相互作用。8A2和8G2能够以剂量依赖性方式抑制结合。[0030]方法：重组天然GDF15、GDNF、GFRa1、GFRa2、GFRa3、Gas1蛋白、抗GDF15和抗GDNF购自RDSystems。串联FcGDF15包含第一Fc区和第二Fc区以及C端的天然GDF15SEQID.N0:2。第一和第二Fc区通过柔性接头连接以形成连续多肽并二聚化以形成Fc二聚体。表达重组串联的Fc和GFRAL的ECD并通过Novoprotein纯化。从Taconic获取GFRAL敲除小鼠，通过同源重组将来自GFRAL基因的外显子2和3替换为LacZNeo盒。[0031]免疫沉淀和免疫印迹分析。将HEK293细胞维持在补充有10%胎牛血清和青霉素链霉素的Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基中。使用Lipofectamine2000转染试剂Invitrogen，用表达载体转染细胞。在PBS和1%NP40加蛋白酶抑制剂混合物中收获细胞裂解物。在lugml串联FcGDF15重组蛋白存在的情况下，用抗FLAG™抗体缀合的珠粒进行免疫沉淀。用抗FLAG™和抗人Fc抗体进行免疫印迹。[0032]固相结合测定。将Nunc96孔板在4°C下用50ul0.2ugml重组GFRa受体包被过夜。用含有0.05%Tween20的PBS洗涤后，在室温下向每个孔中添加50ullugml重组GDNF或GDF15SEQID.N0:2蛋白。2小时后，添加抗GDNF或抗GDF15抗体，并将板在室温下再孵育1小时。洗涤板并使用HRP缀合的二抗用于检测。[0033]3卩1?光谱术。使用8丨：〇“《3000仪器来测量60卩153£010.卿：2与0?1^1SEQID.N0:4受体的结合动力学。测量在25°C下进行。将样品溶解于PBS+0.05%Tween20,pH7.4中。使用胺偶联化学法将GFRAL蛋白以243响应单位RU的水平固定化在CM5传感器芯片的流动室上。使用多个循环评估结合。每个循环由以下步骤组成：1以30ulmin的流速注射约45ylGDF15,随后解离5分钟；和2使用约15ul10mM甘氨酸盐酸盐，pH1.5再生。使用BIA评估软件评估每个循环的结合和解离速率。[0034]动物和治疗。在该研宄中使用野生型和GFRAL纯合敲除同窝小鼠。每两天一次以〇.lmgkg腹膜内（“i.p”）注射重组串联FcGDF15蛋白或媒介物PBS。在指定时间后，测量体重和食物摄入。收集尾静脉血液并通过血糖仪测量血糖。[0035]口服葡萄糖耐量测试。在口服施用葡萄糖2gkg之前6小时使小鼠禁食，并且临给药前、在葡萄糖攻击后15、30、60和120分钟测量葡萄糖水平。[0036]序列人⑶F15AA序列（SEQIDN0:1MPGQELRTVNGSQMLLVLLVLSWLPHGGALSLAEASRASFPGPSELHSEDSRFRELRKRYEDLLTRLRANQSWEDSNTDLVPAPAVRILTPEVRLGSGGHLHLRISRAALPEGLPEASRLHRALFRLSPTASRSWDVTRPLRRQLSLARPQAPALHLRLSPPPSQSDQLLAESSSARPQLELHLRPQAARGRRRARARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI人活性GDF15AA序列SEQIDN0:2ARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADffVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI人GDF15DNA序列（SEQIDN0:3ATGCCCGGGCAAGAACTCAGGACGGTGAATGGCTCTCAGATGCTCCTGGTGTTGCTGGTGCTCTCGTGGCTGCCGCATGGGGGCGCCCTGTCTCTGGCCGAGGCGAGCCGCGCAAGTTTCCCGGGACCCTCAGAGTTGCACTCCGAAGACTCCAGATTCCGAGAGTTGCGGAAACGCTACGAGGACCTGCTAACCAGGCTGCGGGCCAACCAGAGCTGGGAAGATTCGAACACCGACCTCGTCCCGGCCCCTGCAGTCCGGATACTCACGCCAGAAGTGCGGCTGGGATCCGGCGGCCACCTGCACCTGCGTATCTCTCGGGCCGCCCTTCCCGAGGGGCTCCCCGAGGCCTCCCGCCTTCACCGGGCTCTGTTCCGGCTGTCCCCGACGGCGTCAAGGTCGTGGGACGTGACACGACCGCTGCGGCGTCAGCTCAGCCTTGCAAGACCCCAGGCGCCCGCGCTGCACCTGCGACTGTCGCCGCCGCCGTCGCAGTCGGACCAACTGCTGGCAGAATCTTCGTCCGCACGGCCCCAGCTGGAGTTGCACTTGCGGCCGCAAGCCGCCAGGGGGCGCCGCAGAGCGCGTGCGCGCAACGGGGACCACTGTCCGCTCGGGCCCGGGCGTTGCTGCCGTCTGCACACGGTCCGCGCGTCGCTGGAAGACCTGGGCTGGGCCGATTGGGTGCTGTCGCCACGGGAGGTGCAAGTGACCATGTGCATCGGCGCGTGCCCGAGCCAGTTCCGGGCGGCAAACATGCACGCGCAGATCAAGACGAGCCTGCACCGCCTGAAGCCCGACACGGTGCCAGCGCCCTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCCCATGGTGCTCATTCAAAAGACCGACACCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATGATGACTTGTTAGCCAAAGACTGCCACTGCATATGA人GFRAL受体AA序列（SEQIDN0:4MIVFIFLAMGLSLENEYTSQTNNCTYLREQCLRDANGCKHAWRVMEDACNDSDPGDPCKMRNSSYCNLSIQYLVESNFQFKECLCTDDFYCTVNKLLGKKCINKSDNVKEDKFKWNLTTRSHHGFKGMffSCLEVAEACVGDVVCNAQLASYLKACSANGNPCDLKQCQAAIRFFYQNIPFNIAQMLAFCDCAQSDIPCQQSKEALHSKTCAVNMVPPPTCLSVIRSCQNDELCRRHYRTFQSKCWQRVTRKCHEDENCISTLSKQDLTCSGSDDCKAAYIDILGTVLQVQCTCRTITQSEESLCKIFQHMLHRKSCFNYPTLSNVKGMALYTRKHANKITLTGFHSPFNGEVIYAAMCMTVTCGILLLVMVKLRTSRISSKARDPSSIQIPGEL人GFRAL受体DNA序列（SEQIDNO:5ATGATAGTGTTTATTTTCTTGGCTATGGGGTTAAGCTTGGAAAATGAATACACTTCCCAAACCAATAATTGCACATATTTAAGAGAGCAATGCTTACGTGATGCAAATGGATGTAAACATGCTTGGAGAGTAATGGAAGATGCCTGCAATGATTCAGATCCAGGTGACCCCTGCAAGATGAGGAATTCATCATACTGTAACCTGAGTATCCAGTACTTAGTGGAAAGCAATTTCCAATTTAAAGAGTGTCTTTGCACTGATGACTTCTATTGTACTGTGAACAAACTGCTTGGAAAAAAATGTATCAATAAATCAGATAACGTGAAAGAGGATAAATTCAAATGGAATCTAACTACACGTTCCCATCATGGATTCAAAGGGATGTGGTCCTGTTTGGAAGTGGCAGAGGCATGTGTAGGGGATGTGGTCTGTAATGCACAGTTGGCCTCTTACCTTAAAGCTTGCTCAGCAAATGGAAATCCGTGTGATCTGAAACAGTGCCAAGCAGCCATACGGTTCTTCTATCAAAATATACCTTTTAACATTGCCCAGATGTTGGCTTTTTGTGACTGTGCTCAATCTGATATACCTTGTCAGCAGTCCAAAGAAGCTCTTCACAGCAAGACATGTGCAGTGAACATGGTTCCACCCCCTACTTGCCTCAGTGTAATTCGCAGCTGCCAAAATGATGAATTATGCAGGAGGCACTATAGAACATTTCAGTCAAAATGCTGGCAGCGTGTGACTAGAAAGTGCCATGAAGATGAGAATTGCATTAGCACCTTAAGCAAACAGGACCTCACTTGTTCAGGAAGTGATGACTGCAAAGCTGCTTACATAGATATCCTTGGGACGGTCCTTCAAGTGCAATGTACCTGTAGGACCATTACACAAAGTGAGGAATCTTTGTGTAAGATTTTCCAGCACATGCTTCATAGAAAATCATGTTTCAATTATCCAACCCTGTCTAATGTCAAAGGCATGGCATTGTATACAAGAAAACATGCAAACAAAATCACTTTAACTGGATTTCATTCCCCCTTCAATGGAGAAGTAATCTATGCTGCCATGTGCATGACAGTCACCTGTGGAATCCTTCTGTTGGTTATGGTCAAGCTTAGAACTTCCAGAATATCAAGTAAAGCAAGAGATCCTTCATCGATCCAAATACCTGGAGAACTCTGA小鼠GDF15AA序列（SEQIDN0:6MAPPALQAQPPGGSQLRFLLFLLLLLLLLSWPSQGDALAMPEQRPSGPESQLNADELRGRFQDLLSRLHANQSREDSNSEPSPDPAVRILSPEVRLGSHGQLLLRVNRASLSQGLPEAYRVHRALLLLTPTARPWDITRPLKRALSLRGPRAPALRLRLTPPPDLAMLPSGGTQLELRLRVAAGRGRRSAHAHPRDSCPLGPGRCCHLETVQATLEDLGWSDWVLSPRQLQLSMCVGECPHLYRSANTHAQIKARLHGLQPDKVPAPCCVPSSYTPVVLMHRTDSGVSLQTYDDLVARGCHCA小鼠活性GDF15AA序列（SEQIDNO:7AHPRDSCPLGPGRCCHLETVQATLEDLGWSDWVLSPRQLQLSMCVGECPHLYRSANTHAQIKARLHGLQPDKVPAPCCVPSSYTPVVLMHRTDSGVSLQTYDDLVARGCHCA小鼠⑶F15DNA序列（SEQIDNO:8ATGGCCCCGCCCGCGCTCCAGGCCCAGCCTCCAGGCGGCTCTCAACTGAGGTTCCTGCTGTTCCTGCTGCTGTTGCTGCTGCTGCTGTCATGGCCATCGCAGGGGGACGCCCTGGCAATGCCTGAACAGCGACCCTCCGGCCCTGAGTCCCAACTCAACGCCGACGAGCTACGGGGTCGCTTCCAGGACCTGCTGAGCCGGCTGCATGCCAACCAGAGCCGAGAGGACTCGAACTCAGAACCAAGTCCTGACCCAGCTGTCCGGATACTCAGTCCAGAGGTGAGATTGGGGTCCCACGGCCAGCTGCTACTCCGCGTCAACCGGGCGTCGCTGAGTCAGGGTCTCCCCGAAGCCTACCGCGTGCACCGAGCGCTGCTCCTGCTGACGCCGACGGCCCGCCCCTGGGACATCACTAGGCCCCTGAAGCGTGCGCTCAGCCTCCGGGGACCCCGTGCTCCCGCATTACGCCTGCGCCTGACGCCGCCTCCGGACCTGGCTATGCTGCCCTCTGGCGGCACGCAGCTGGAACTGCGCTTACGGGTAGCCGCCGGCAGGGGGCGCCGAAGCGCGCATGCGCACCCAAGAGACTCGTGCCCACTGGGTCCGGGGCGCTGCTGTCACTTGGAGACTGTGCAGGCAACTCTTGAAGACTTGGGCTGGAGCGACTGGGTGCTGTCCCCGCGCCAGCTGCAGCTGAGCATGTGCGTGGGCGAGTGTCCCCACCTGTATCGCTCCGCGAACACGCATGCGCAGATCAAAGCACGCCTGCATGGCCTGCAGCCTGACAAGGTGCCTGCCCCGTGCTGTGTCCCCTCCAGCTACACCCCGGTGGTTCTTATGCACAGGACAGACAGTGGTGTGTCACTGCAGACTTATGATGACCTGGTGGCCCGGGGCTGCCACTGCGCTTGA小鼠GFRAL受体AA序列（SEQIDNO:9MLVFIFLAVTLSSENESSSQTNDCAHLIQKCLIDANGCEQSWRSMEDTCLTPGDSCKINNSLHCNLSIQALVEKNFQFKECLCMDDLHCTVNKLFGKKCTNKTDNMEKDNKDKWNLTTTPFYHGFKQMQSCLEVTEACVGDVVCNAQLALYLKACSANGNLCDVKHCQAAIRFFYQNMPFNTAQMLAFCDCAQSDIPCQQSKETLHSKPCALNIVPPPTCLSVIHTCRNDELCRTHYRTFQTECWPHITGKCHEDETCISMLGKQDLTCSGSESCRAAFLGTFGTVLQVPCACRGVTQAEEHVCMIFQHMLHSKSCFNYPTPNVKDISSYEKKNSKEITLTGFNSFFNGELLYVVVCMAVTCGILFLVMLKLRIQSEKRDPSSIEIAGGVIIQ小鼠GFRAL受体DNA序列（SEQIDNO:10ATGCTAGTGTTCATTTTCCTGGCTGTTACGTTAAGCTCAGAAAATGAATCCTCTTCCCAAACAAATGATTGTGCACATTTAATACAGAAATGCTTGATTGATGCAAATGGCTGTGAGCAGTCATGGAGATCAATGGAAGACACCTGCCTTACTCCAGGTGACTCCTGCAAGATAAATAATTCACTACATTGTAACCTGAGTATCCAGGCTTTGGTGGAAAAAAATTTCCAATTTAAAGAGTGTCTTTGTATGGATGACCTCCACTGTACAGTAAACAAACTTTTTGGAAAAAAGTGCACCAATAAGACAGATAACATGGAAAAGGACAATAAAGATAAATGGAATCTAACTACTACTCCTTTCTATCATGGATTCAAACAGATGCAGTCTTGTTTGGAGGTGACAGAGGCGTGTGTAGGGGATGTGGTTTGTAATGCACAGTTGGCCCTTTACCTTAAAGCATGCTCAGCAAATGGAAATCTGTGTGATGTGAAACACTGCCAAGCAGCCATACGGTTCTTCTATCAAAATATGCCTTTTAACACTGCCCAGATGTTGGCTTTTTGTGACTGTGCTCAATCTGATATACCCTGTCAGCAATCCAAAGAAACTCTTCACAGCAAGCCATGTGCACTGAATATAGTTCCACCCCCCACTTGCCTCAGTGTAATTCACACTTGCCGAAATGATGAATTATGCAGGACACACTACCGAACATTCCAGACAGAATGCTGGCCCCACATAACTGGGAAGTGCCATGAAGATGAGACCTGCATTAGCATGTTAGGCAAGCAAGACCTTACTTGTTCTGGGAGTGAGAGCTGCAGGGCTGCCTTCCTAGGAACCTTTGGGACAGTCCTGCAAGTACCCTGTGCTTGCAGGGGCGTTACACAGGCTGAAGAACACGTGTGCATGATTTTCCAGCACATGCTTCATAGCAAATCGTGTTTCAATTACCCAACTCCTAATGTCAAAGACATTTCCTCATATGAAAAAAAGAATTCAAAAGAAATTACTCTGACTGGATTCAATTCTTTCTTCAATGGAGAACTACTCTATGTTGTTGTGTGCATGGCAGTTACCTGTGGAATTCTTTTCTTGGTGATGCTCAAGTTAAGGATACAAAGTGAAAAAAGAGATCCCTCATCCATCGAAATAGCTGGAGGTGTCATCATTCAGTGA用于生成针对GFRAL的小鼠抗体的重组蛋白抗原SEQIDNO:11DHHHHHHAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTKPPSRDELTKNQVSLSCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTVPVLDSDGSFRLASYLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGRAQTNDCAHLIQKCLIDANGCEQSWRSMEDTCLTP⑶SCKINNSLHCNLSIQALVEKNFQFKECLCMDDLHCTVNKLFGKKCTNKTDNMEKDNKDKWNLTTTPFYHGFKQMQSCLEVTEACVGDVVCNAQLALYLKACSANGNLCDVKHCQAAIRFFYQNMPFNTAQMLAFCDCAQSDIPCQQSKETLHSKPCALNIVPPPTCLSVIHTCRNDELCRTHYRTFQTECWPHITGKCHEDETCISMLGKQDLTCSGSESCRAAFLGTFGTVLQVPCACRGVTQAEEHVCMIFQHMLHSKSCFNYPTPNVKDISSYEKKNSKE

权利要求：1.降低哺乳动物中的血糖的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的激动GFRAL受体的化合物。2.增加哺乳动物中的血糖的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的诘抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体的化合物。、3.降低哺乳动物中的体重的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的激动GFRAL受体的化合物。4.增加哺乳动物中的体重的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的诘抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体的化合物。'5.权利要求2或4中任一项的方法，其中所述化合物通过抑制GDF15的结合来阻断GFRAL受体。6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述化合物包含抗体或其片段。7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述哺乳动物是人。8.权利要求7的方法，其中所述GFRAL受体具有SEQIDN0:4的氨基酸序列，且^15具有SEQIDNO:2的氨基酸序列。、9.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述哺乳动物是小鼠。10.权利要求9的方法，其中所述GFRAL受体具有SEQIDNO:9的氨基酸序列，且GDF15具有SEQIDN0:7的氨基酸序列。、11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述化合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂一起施用。12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述化合物与GLP-1、胰岛素、胰岛素类似物、DPP-4抑制剂、SGLT2抑制剂和胰高血糖素中的一种或多种一起施用。13.药物组合物，其包含激动GFRAL受体的化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。14.药物组合物，其包含拮抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体的化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。15.权利要求13或14的组合物，其还包含GLP-1、胰岛素、胰岛素类似物、Dpp-4抑制剂、SGLT2抑制剂和胰高血糖素中的一种或多种。16.权利要求15的组合物，其中将所述化合物和GLP-1、胰岛素、胰岛素类似物、DPP-4抑制剂、SGLT2抑制剂和胰高血糖素中的一种或多种融合。17.分离的化合物，其激动GFRAL受体。18.分离的化合物，其拮抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体。19.权利要求16或17的化合物，其中所述化合物是抗体或其片段。20.权利要求19的化合物，其中所述抗体或其片段与GDF15结合GFRAL上的相同表位或氨基酸区域。21.权利要求17或18的化合物，其中所述化合物是与GDF15结合GFRAL上的相同表位或氨基酸区域的肽或蛋白。22.治疗哺乳动物中的糖尿病的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的激动GFRAL受体的化合物。23.治疗哺乳动物中的肥胖症的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的激动GFRAL受体的化合物。24.治疗哺乳动物中的恶病质的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的拮抗、抑制、中和或阻断GFRAL受体的化合物。25.蛋白，其包含a不溶性人GFRAL受体的结合GDF15的可溶性片段，其中所述不溶性人GFRAL受体特异性结合人GDF15,和⑹人免疫球蛋白IgG重链的恒定区的除了所述恒定区的第一个结构域之外的所有结构域;其中所述蛋白特异性结合人GDF15。26.权利要求25的蛋白，其中所述不溶性人GFRAL受体包含SEQIDNO:4。27.权利要求25的蛋白，其中所述蛋白基本上由以下组成：不溶性AGFRAL受体的细胞外区域和人IgG免疫球蛋白重链的恒定区的除了所述恒定区的第一个结构域之外的所有结构域。

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