申请/专利权人：湖北省农业科学院粮食作物研究所

申请日：2019-04-03

公开（公告）日：2022-03-08

公开（公告）号：CN109811082B

主分类号：C12Q1/6895(20180101)

分类号：C12Q1/6895(20180101);C12N15/11(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.03.08#授权;2019.06.21#实质审查的生效;2019.05.28#公开

摘要：本发明公开了一种用于检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10‑D1的分子标记及其应用。本发明提供了特异引物对，由引物872s和引物1182a组成；引物872s如序列5所示；引物1182a如序列8所示。本发明提供了特异引物组，除特异引物对中的两条引物，还包括引物122s、引物339s、引物380s、引物652s、引物409a、引物703a和引物1419a中的一条或多条；引物122s如序列1所示；引物339s如序列2所示；引物380s如序列3所示；引物652s如序列4所示；引物409a如序列6所示；引物703a如序列7所示；引物1419a如序列9所示。本发明有助于小麦抗穗发芽分子育种。

主权项：1.特异引物对，由引物872s和引物1182a组成；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。

全文数据：用于检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10-D1的分子标记及其应用技术领域本发明属于生物技术领域，具涉及用于检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10-D1的分子标记及其应用。背景技术近年来随着极端气候的频繁发生，小麦穗发芽发生现象呈扩大递增趋势，是影响小麦安全稳产的重要因素之一。利用分子标记辅助育种技术可加速穗发芽抗性小麦品种育成进程，积极应对穗发芽灾害发生。Tamyb10-D1基因被定位于小麦3DL染色体，被证实与小麦穗发芽抗性相关。开发的适宜的分子标记，从而区分穗发芽抗性基因型Tamyb10-D1b和穗发芽感性基因型Tamyb10-D1a，具有重要的价值。当基因型为Tamyb10-D1b时，可获得目标条带，当基因型为Tamyb10-D1a纯合型时，为序列缺失，无扩增产物。Himi等设计Tamyb10-D1分子标记为上游引物Tamyb10-LP9和下游引物Tamyb10-RP3，该标记扩增效果较好，但扩增产物大，对DNA模版质量要求较高。发明内容本发明的目的是提供一种用于检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10-D1的分子标记及其应用。本发明提供了特异引物对，由引物872s和引物1182a组成；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。本发明还提供了特异引物组，包括引物872s和引物1182a；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。所述特异引物组还包括引物122s、引物339s、引物380s、引物652s、引物409a、引物703a和引物1419a中的任意一条或多条；引物122s如序列表的序列1所示；引物339s如序列表的序列2所示；引物380s如序列表的序列3所示；引物652s如序列表的序列4所示；引物409a如序列表的序列6所示；引物703a如序列表的序列7所示；引物1419a如序列表的序列9所示。本发明还保护特异引物组甲，由引物380s、引物652s、引物872s和引物1182a组成；引物380s如序列表的序列3所示；引物652s如序列表的序列4所示；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。本发明还保护特异引物组乙，由引物872s、引物1182a和引物1419a组成；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示；引物1419a如序列表的序列9所示。本发明还保护特异引物组丙，由引物652s、引物872s、引物1182a和引物1419a组成；引物652s如序列表的序列4所示；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示；引物1419a如序列表的序列9所示。本发明还保护所述特异引物的应用，为鉴定待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型还是Tamyb10-D1a基因型。本发明还保护以上任一所述特异引物组的应用，为鉴定待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型还是Tamyb10-D1a基因型。本发明还保护一种鉴定待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型还是Tamyb10-D1a基因型的方法，包括如下步骤：以待测小麦的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对进行PCR扩增，如果得到特异性扩增产物，待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型，如果没有得到特异性扩增产物，待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1a基因型。所述特异性扩增产物显示为一条位于300-400bp区间的电泳带。本发明还保护一种鉴定待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型还是Tamyb10-D1a基因型的方法，包括如下步骤：以待测小麦的基因组DNA为模板，采用特异引物组进行PCR扩增，如果得到特异性扩增产物，待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型，如果没有得到特异性扩增产物，待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1a基因型。所述特异性扩增产物为至少一种特异性扩增产物。特异引物组为特异引物组甲时，所述特异性扩增产物为两种或三种；两种特异性扩增产物分别显示为一条位于300-400bp区间内的电泳带和一条位于800-900bp区间内的电泳带；三种特异性扩增产物分别显示为一条位于300-400bp区间内的电泳带、一条位于500-600bp区间内的电泳带和一条位于800-900bp区间内的电泳带。特异引物组为特异引物组乙时，所述特异性扩增产物为两种，分别显示为一条位于300-400bp区间内的电泳带和一条位于500-600bp区间内的电泳带。特异引物组为特异引物组丙时，所述特异性扩增产物为两种或三种；两种特异性扩增产物分别显示为一条位于300-400bp区间内的电泳带和一条位于500-600bp区间内的电泳带；三种特异性扩增产物分别显示为一条位于300-400bp区间内的电泳带、一条位于500-600bp区间内的电泳带两条带的叠加和一条位于700-800bp区间内的电泳带。基因型为Tamyb10-D1b基因型即：以待测小麦的基因组DNA为模板，采用LP9RP3引物对进行扩增，具有扩增产物。基因型为Tamyb10-D1b基因型即：以待测小麦的基因组DNA为模板，采用LP9RP3引物对进行扩增，不具有扩增产物。LP9RP3引物对由引物Tamyb10-LP9和引物Tamyb10-RP3组成；引物Tamyb10-LP9如序列表的序列10所示；引物Tamyb10-RP3如序列表的序列11所示。Tamyb10-D1b基因型即穗发芽抗性基因型。Tamyb10-D1a基因型即穗发芽感性基因型。以上任一所述待测小麦为Tamyb10-D1基因的基因型为纯合型的小麦。为了使Tamyb10-D1基因在小麦穗发芽抗性分子育种中得到高效和快速利用，本发明的发明人开发了Tamyb10-D1的多个分子标记，扩增片段多集中在300-1000bp范围，扩增效率较高，PCR产物容易检测，降低了对模板DNA的质量要求。而且通过采用多重PCR技术可提高Tamyb10-D1基因分子标记检测的准确性，适用于批量分子标记检测。本发明开发的分子标记可通过多重PCR高效准确检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10-D1b的基因型，同时含有引物652s或703a的多重PCR可区分普通小麦和粗山羊草的myb10-D1基因型，本发明有助于小麦抗穗发芽分子育种。附图说明图1为实施例2中的电泳图。图2为实施例2中的相对定量结果。图3为实施例3中的电泳图。图4为实施例4中的电泳图。图5为实施例4中的测序结果部分。图6为实施例5中的电泳图。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。引物Tamyb10-LP9用LP9表示：5’-taggccaacaccttctaaacg-3’；引物Tamyb10-RP3用RP3表示：5’-aggcacaccagcttatttgg-3’。国内小麦品种系：中国春、扬麦20、郑麦9023、鄂麦27、鄂恩5号、苏麦3号、襄麦25、Wuhan1、川麦42、川麦43、鄂麦580、荆州66、济麦22、矮抗58。国外小麦品种系：14FHBSN6405、14FHBSN6418；中国春缺体-四体系材料：N3AT3B，N3BT3A和N3DT3A。以上各个小麦品种系均为纯合基因型。实施例1、引物的设计和制备经过大量序列分析、引物设计以及效果验证，筛选到用于鉴定Tamyb10-D1基因特异性分子标记的的9条引物，其中5条上游引物和4条下游引物，具体序列见表1。表1引物名称核苷酸序列5'→3'Tm值℃122s序列1CCAGACGAGCTGGTAGGTTACTCAC63.6339s序列2AAGAGTGAGATCACTGGTTTAGCTTTAG61.1380s序列3GGTCGTGTTGACGGCGTG60.8652s序列4GCATATTCCTAGTGTAATACGGGGTAC61.6872s序列5CCAACACCTTCTAAACGTATATAACTTCT60.5409a序列6CACAATATCTCACACGCCGTCA61.7703a序列7CATCTTCGTTCACACTATATACTACGTACC61.31182a序列8GGCATTTCGTTCTAGACCTCCAT62.31419a序列9GGTCACTGTTATCTGACGCTGGAT61.6分别合成表1中的各条引物以及引物Tamyb10-LP9和引物Tamyb10-RP3。实施例2、引物的扩增效果供试材料：扬麦20、郑麦9023。1、取供试材料的新鲜叶片，提取基因组DNA。2、以基因组DNA为模板，进行PCR扩增。PCR反应体系20μL：10μL2×EsTaqMasterMixDye，0.4μL引物溶液引物溶液中，每种引物的浓度均为10μmolμl，1μLDNA模板含约30ngDNA，余量为水。2×EsTaqMasterMixDye：康为世纪，产品目录号CW0690M。PCR扩增中分别采用122s409a引物对、122s703a引物对、122s1182a引物对、122s1419a引物对、339s703a引物对、339s1182a引物对、339s1419a引物对、380s703a引物对、380s1182a引物对、380s1419a引物对、652s1182a引物对、652s1419a引物对、872s1182a引物对、872s1419a引物对、LP9RP3引物对。PCR反应程序：95℃预变性3min；95℃变性30s、60℃退火30s、72℃延伸40s，35个循环；72℃延伸7min，10℃保存。3、取步骤2的产物，进行1％琼脂糖凝胶进行电泳，用凝胶成像仪进行拍照。电泳图见图1。图1中：A图，以扬麦20的基因组DNA为模板；B图，以郑麦9023的基因组DNA为模板；M对应DL100DNAmarker，1对应122s409a的扩增产物，2对应122s703a的扩增产物，3对应122s1182a的扩增产物，4对应122s1419a的扩增产物，5对应339s703a的扩增产物，6对应339s1182a的扩增产物，7对应339s1419a的扩增产物，8对应380s703a的扩增产物，9对应380s1182a的扩增产物，10对应380s1419a的扩增产物，11对应652s1182a的扩增产物，12对应652s1419a的扩增产物，13对应872s1182a的扩增产物，14对应872s1419a的扩增产物，15对应LP9RP3的扩增产物。采用LP9RP3引物对进行扩增，扬麦20具有特异性扩增产物、为Tamyb10-D1b纯合基因型，郑麦9023不具有特异性扩增产物、为Tamyb10-D1a纯合基因型。以扬麦20的基因组DNA为模板，采用各个引物对时均具有特异性扩增产物、均判断为Tamyb10-D1b纯合基因型。以郑麦9023的基因组DNA为模板，采用引物380s时存在非特异性扩增但非特异性扩增的条带很弱，采用其他引物时均不存在非特异性扩增。利用凝胶成像软件ImageLab的定量工具对图1的A中的各个特异性扩增条带进行相对量分析，结果见图2。图2中的1至15对应于图1中的泳道1至15。在设定LP9RP3引物对的特异性扩增条带的相对量为1时，122s1182a引物对和122s1419a引物对的特异性扩增条带的相对量均为1左右，其它各个引物对的特异性扩增条带的相对量均显著高于1，380s703a引物对、380s1182a引物对、652s1182a引物对、872s1182a引物对和872s1419a引物对的特异性扩增条带的相对量均为3左右，872s1182a引物对特异性扩增条带的相对量最高达3.34。实施例3、染色体定位分析标记特异性供试材料：中国春；中国春缺体-四体系材料：N3AT3B、N3BT3A和N3DT3A。方法同实施例2。电泳图见图3。图3中，M为DL100DNAmarker，1为中国春，2为N3AT3B，3为N3BT3A，4为N3DT3A；5为以水为模板的空白对照。采用LP9RP3引物对进行扩增，中国春、N3AT3B、N3BT3A均具有特异性扩增产物，N3DT3A不具有特异性扩增产物。采用122s409a引物对、122s703a引物对、122s1182a引物对、122s1419a引物对、339s703a引物对、339s1182a引物对、339s1419a引物对、652s1182a引物对、652s1419a引物对、872s1182a引物对、872s1419a引物对、LP9RP3引物对时，中国春均具有特异性扩增产物，N3AT3B均具有特异性扩增产物，N3BT3A均具有特异性扩增产物，N3DT3A均不具有特异性扩增产物。采用380s703a引物对、380s1182a引物对、380s1419a时，中国春均具有特异性扩增产物，N3AT3B均具有特异性扩增产物，N3BT3A均具有特异性扩增产物，N3DT3A均存在非特异性扩增但非特异性扩增的条带很弱。实施例4、Tamyb10-D1特异性标记对小麦品种的检测一、试验一供试材料：鄂麦27、鄂恩5号、14FHBSN6405、苏麦3号、襄麦25、Wuhan1、川麦42、鄂麦580、14FHBSN6418、荆州66、济麦22、矮抗58。方法同实施例2。电泳图见图4。图4中，M为DL100DNAmarker，1为鄂麦27，2为鄂恩5号，3为14FHBSN6405，4为苏麦3号，5为襄麦25，6为Wuhan1，7为川麦42，8为鄂麦580，9为14FHBSN6418，10为荆州66，11为济麦22，12为矮抗58，13为以水为模板的空白对照。采用LP9RP3引物对进行扩增：鄂麦27、鄂恩5号、14FHBSN6405、苏麦3号、襄麦25、Wuhan1、川麦42，均具有特异性扩增产物，均为Tamyb10-D1b纯合基因型；鄂麦580、14FHBSN6418、荆州66、济麦22、矮抗58，均不具有特异性扩增产物，均为Tamyb10-D1a纯合基因型。采用122s409a引物对、122s1182a引物对、122s1419a引物对、339s1182a引物对、339s1419a引物对、380s1182a引物对、380s1419a、872s1182a引物对或872s1419a引物对进行扩增：鄂麦27、鄂恩5号、14FHBSN6405、苏麦3号、襄麦25、Wuhan1、川麦42，均具有特异性扩增产物，均为Tamyb10-D1b纯合基因型；鄂麦580、14FHBSN6418、荆州66、济麦22、矮抗58，均不具有特异性扩增产物，均为Tamyb10-D1a纯合基因型。采用引物652s652s1182a引物对、652s1419a引物对进行扩增：鄂麦27、鄂恩5号、14FHBSN6405、苏麦3号、襄麦25、Wuhan1，均具有特异性扩增产物，均为Tamyb10-D1b纯合基因型；鄂麦580、14FHBSN6418、荆州66、济麦22、矮抗58，均不具有特异性扩增产物，均为Tamyb10-D1a纯合基因型；川麦42不显示特异性扩增产物。采用引物703a时122s703a引物对、339s703a引物对、380s703a引物对进行扩增：鄂麦27、鄂恩5号、14FHBSN6405、苏麦3号、襄麦25、Wuhan1，均具有特异性扩增产物，均为Tamyb10-D1b纯合基因型；鄂麦580、14FHBSN6418、荆州66、济麦22、矮抗58，均不具有特异性扩增产物，均为Tamyb10-D1a纯合基因型；川麦42不显示特异性扩增产物。二、试验二供试材料：川麦43。PCR扩增中采用122s703a引物对或LP9RP3引物对，其他均同实施例2。采用LP9RP3引物对进行扩增：川麦43具有特异性扩增产物，为Tamyb10-D1b纯合基因型。采用122s703a引物对进行扩增：川麦43不显示特异性扩增产物。三、测序将步骤一中供试材料为川麦42且采用LP9RP3引物对时的扩增产物进行测序。将步骤二中供试材料为川麦43且采用LP9RP3引物对时的扩增产物进行测序。测序结果见图5差异部分。发现川麦42和川麦43的Tamyb10-D1b基因均缺失了14bp片段起始密码子下游671-684bp区域，该缺失位于第二内含子内，正好是引物703a和引物652s的3’端特异性结合区域，因此这两个品种无法用含有引物703a或引物652s的引物对进行扩增。川麦42和川麦43的Tamyb10-D1b基因来自粗山羊草节节麦。因此，与小麦来源的Tamyb10-D1b基因相比，粗山羊草来源的Tamyb10-D1b基因相比存在14bp的缺失。含有引物703a或引物652s的引物对可用于鉴别小麦来源的Tamyb10-D1b基因和粗山羊草来源的myb10-D1b基因。实施例5、多重PCR高效检测Tamyb10-D1基因型因新设计的引物为显性标记，只能检测Tamyb10-D1b基因型，在基因型为Tamyb10-D1a时无扩增产物。为了排除DNA质量等因素造成的无扩增产物或扩增条带浓度低无法检测等情况，采用多重PCR方法，以提高PCR检测结果的准确性。供试材料：鄂麦27、襄麦25、川麦42、川麦43、鄂麦580、14FHBSN6418。一、利用引物组合872s1182a1419a进行2重PCR1、取供试材料的新鲜叶片，提取基因组DNA。2、以基因组DNA为模板，进行PCR扩增。PCR反应体系20μL：10μL2×EsTaqMasterMixDye，0.4μL引物溶液引物溶液中，每种引物的浓度均为10μmolμl，1μLDNA模板含约30ngDNA，余量为水。2×EsTaqMasterMixDye：康为世纪，产品目录号CW0690M。PCR扩增中采用由引物872s、引物1182a和引物1419a组成的引物组合。PCR反应程序：95℃预变性3min；95℃变性30s、60℃退火30s、72℃延伸40s，35个循环；72℃延伸7min，10℃保存。3、取步骤2的产物，进行1％琼脂糖凝胶进行电泳，用凝胶成像仪进行拍照。电泳图见图6A。图6A中，M为DL100DNAmarker，1为鄂麦27，2为襄麦25，3为川麦42，4为川麦43，5为鄂麦580，6为14FHBSN6418；7为以水为模板的空白对照。鄂麦27、襄麦25、川麦42、川麦43，均可以观察到两条特异性扩增产物一条位于300-400bp区间内，一条位于500-600bp区间内，均为Tamyb10-D1b纯合基因型。鄂麦580、14FHBSN6418，均不具有特异性扩增产物，均为Tamyb10-D1a纯合基因型。二、利用引物组合380s652s872s1182a进行3重PCR1、取供试材料的新鲜叶片，提取基因组DNA。2、以基因组DNA为模板，进行PCR扩增。PCR反应体系20μL：10μL2×EsTaqMasterMixDye，0.4μL引物溶液引物溶液中，每种引物的浓度均为10μmolμl，1μLDNA模板含约30ngDNA，余量为水。2×EsTaqMasterMixDye：康为世纪，产品目录号CW0690M。PCR扩增中采用由引物380s、引物652s、引物872s和引物1182a组成的引物组合。PCR反应程序：95℃预变性3min；95℃变性30s、60℃退火30s、72℃延伸40s，35个循环；72℃延伸7min，10℃保存。3、取步骤2的产物，进行1％琼脂糖凝胶进行电泳，用凝胶成像仪进行拍照。电泳图见图6B。图6B中，M为DL100DNAmarker，1为鄂麦27，2为襄麦25，3为川麦42，4为川麦43，5为鄂麦580，6为14FHBSN6418；7为以水为模板的空白对照。鄂麦27、襄麦25，均可以观察到三条特异性扩增产物一条位于300-400bp区间内，一条位于500-600bp区间内，一条位于800-900bp区间内，均为Tamyb10-D1b纯合基因型。川麦42、川麦43，均可以观察到两条特异性扩增产物一条位于300-400bp区间内，一条位于800-900bp区间内，均为Tamyb10-D1b纯合基因型。鄂麦580、14FHBSN6418，均不具有特异性扩增产物，均为Tamyb10-D1a纯合基因型。三、利用引物组合652s872s1182a1419a进行4重PCR1、取供试材料的新鲜叶片，提取基因组DNA。2、以基因组DNA为模板，进行PCR扩增。PCR反应体系20μL：10μL2×EsTaqMasterMixDye，0.4μL引物溶液引物溶液中，每种引物的浓度均为10μmolμl，1μLDNA模板含约30ngDNA，余量为水。2×EsTaqMasterMixDye：康为世纪，产品目录号CW0690M。PCR扩增中采用由引物652s、引物872s、引物1182a和引物1419a组成的引物组合。PCR反应程序：95℃预变性3min；95℃变性30s、60℃退火30s、72℃延伸40s，35个循环；72℃延伸7min，10℃保存。3、取步骤2的产物，进行1％琼脂糖凝胶进行电泳，用凝胶成像仪进行拍照。电泳图见图6C。图6C中，M为DL100DNAmarker，1为鄂麦27，2为襄麦25，3为川麦42，4为川麦43，5为鄂麦580，6为14FHBSN6418；7为以水为模板的空白对照。鄂麦27、襄麦25，均可以观察到三条特异性扩增产物一条位于300-400bp区间内，一条位于500-600bp区间内，一条位于700-800bp区间内，其中500-600bp区间内的扩增产物为两条带的叠加，均为Tamyb10-D1b纯合基因型。川麦42、川麦43，均可以观察到两条特异性扩增产物一条位于300-400bp区间内，一条位于500-600bp区间内，均为Tamyb10-D1b纯合基因型。鄂麦580、14FHBSN6418，均不具有特异性扩增产物，均为Tamyb10-D1a纯合基因型。从图6中可看出，3重PCR的目标条带相对最亮，因此，推荐用引物组合380s652s872s1182a进行3重PCR检测Tamyb10-D1基因型。SEQUENCELISTING湖北省农业科学院粮食作物研究所用于检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10-D1的分子标记及其应用GNCYX19067011PatentInversion3.5125DNAArtificialsequence1ccagacgagctggtaggttactcac25228DNAArtificialsequence2aagagtgagatcactggtttagctttag28318DNAArtificialsequence3ggtcgtgttgacggcgtg18427DNAArtificialsequence4gcatattcctagtgtaatacggggtac27529DNAArtificialsequence5ccaacaccttctaaacgtatataacttct29622DNAArtificialsequence6cacaatatctcacacgccgtca22730DNAArtificialsequence7catcttcgttcacactatatactacgtacc30823DNAArtificialsequence8ggcatttcgttctagacctccat23924DNAArtificialsequence9ggtcactgttatctgacgctggat241021DNAArtificialsequence10taggccaacaccttctaaacg211120DNAArtificialsequence11aggcacaccagcttatttgg20

权利要求：1.特异引物对，由引物872s和引物1182a组成；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。2.特异引物组，包括引物872s和引物1182a；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。3.如权利要求2所述的特异引物组，其特征在于：所述特异引物组还包括引物122s、引物339s、引物380s、引物652s、引物409a、引物703a和引物1419a中的任意一条或多条；引物122s如序列表的序列1所示；引物339s如序列表的序列2所示；引物380s如序列表的序列3所示；引物652s如序列表的序列4所示；引物409a如序列表的序列6所示；引物703a如序列表的序列7所示；引物1419a如序列表的序列9所示。4.特异引物组，由引物380s、引物652s、引物872s和引物1182a组成；引物380s如序列表的序列3所示；引物652s如序列表的序列4所示；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。5.特异引物组，由引物872s、引物1182a和引物1419a组成；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示；引物1419a如序列表的序列9所示。6.所述特异引物组，由引物652s、引物872s、引物1182a和引物1419a组成；引物652s如序列表的序列4所示；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示；引物1419a如序列表的序列9所示。7.特异引物对或特异引物组的应用，为鉴定待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型还是Tamyb10-D1a基因型；所述特异引物对为权利要求1所述特异引物对；所述特异引物组为权利要求2至7中任一所述的特异引物组。8.一种鉴定待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型还是Tamyb10-D1a基因型的方法，包括如下步骤：以待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述特异引物对进行PCR扩增，如果得到特异性扩增产物，待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型，如果没有得到特异性扩增产物，待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1a基因型。9.一种鉴定待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型还是Tamyb10-D1a基因型的方法，包括如下步骤：以待测小麦的基因组DNA为模板，采用特异引物组进行PCR扩增，如果得到特异性扩增产物，待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型，如果没有得到特异性扩增产物，待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1a基因型。

百度查询： 湖北省农业科学院粮食作物研究所 用于检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10-D1的分子标记及其应用

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