申请/专利权人：通化天妍生物技术有限公司;通化师范学院

申请日：2020-04-13

公开（公告）日：2022-03-08

公开（公告）号：CN111296293B

主分类号：A01H4/00(20060101)

分类号：A01H4/00(20060101);A01H1/06(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.03.08#授权;2022.02.18#专利申请权的转移;2020.07.14#实质审查的生效;2020.06.19#公开

摘要：本发明属于植物的繁殖技术领域，具体涉及一种诱导牛尾菜花柄组织突变的新品种培育方法。本申请的诱导牛尾菜花柄组织突变的新品种培育方法，通过以牛尾菜花柄为材料，通过适宜浓度的甲基磺酸乙酯浸泡一定时间，再结合植物组织培养技术，通过采用花柄组织不定芽诱导、不定芽生根复壮等方法，获得各单株独立性强、单株遗传信息纯度高、单株来源清晰等特征的新型的牛尾菜人工栽培品种，该品种遗传稳定，可作为品系栽培和构建牛尾菜突变体库。

主权项：1.一种诱导牛尾菜花柄组织突变的新品种培育方法，其特征在于，包括以下步骤：1材料选择与预处理：6月中下旬，待野生牛尾菜伞形花序放开后选取总花柄，切取3.0cm长度；接着用75%乙醇涮洗10s后移至饱和次氯酸钠溶液浸泡3min，无菌水冲洗8次，并用无菌滤纸吸干表面水分；接着在超净工作台内，将消毒灭菌后的花柄纵向切开，切割成1.0cm的小段形成花柄组织，将花柄组织分批放入不同浓度的EMS溶液中，浸泡20-60min；最后用无菌水冲花柄组织15次，以备接种，EMS以浓度为0.1mol·L-1、pH＝7的磷酸盐缓冲液作为溶剂配制成体积百分比浓度为0.05-0.19%的EMS溶液；2花柄组织不定芽的诱导培养：将步骤1中经过EMS浸泡后的花柄组织转接到花柄组织不定芽诱导培养基中，并置于光照周期8h·d-1、光照强度900lx和温度28±2℃条件下培养72天，花柄组织上部茎皮上产生独立、可分离的不定芽，并继续培养20天，不定芽长至0.8cm，花柄组织不定芽诱导培养基为基本培养基附加3.5mg·L-1氯吡苯脲和1.0mg·L-1KT，以及6.7g·L-1琼脂粉，40g·L-1蔗糖；3不定芽生根复壮培养：将步骤2中不定芽长至0.8cm时，将不定芽剥离转接到不定芽生根复壮培养基中进行生根复壮培养，同时置于光照周期10h·d-1、光照强度1300lx和温度26±2℃条件下培养35天，不定芽完全生长发育成含有根和茎叶的小植株，不定芽生根复壮培养基为基本培养基附加0.05mg·L-1IAA，以及6.8g·L-1琼脂粉，15g·L-1蔗糖；4移栽和定植及品系确定：当步骤3中小植株在培养瓶中长至3.0cm时，从瓶中取出经驯化炼苗后栽植于营养钵中，待长至50cm时，定植栽培到田间，观察其生长情况，并进行分类及注标签；接着将差异植株进行组培快繁，组培快繁后栽培于不同适宜地域；最后进行筛选确定遗传稳定的优良性状突变体作为品系，并进行编号；上述（2）-（3）步骤中基本培养基的成份为：马铃薯上清液50g·L-1；大量元素：25.0mg·L-1NH4NO3，9.0mg·L-1CaCl2·2H2O，10.5mg·L-1MgSO4·7H2O；铁盐：3.2mg·L-1FeSO4·7H2O，2.1mg·L-1Na2·EDTA·2H2O。

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