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申请/专利权人：山东福洋生物科技股份有限公司

摘要：本发明公开了一种重组枯草芽孢杆菌高密度发酵生产DPE的方法，属于生物工程和发酵工程技术领域。本发明公开的一种重组枯草芽孢杆菌高密度发酵生产DPE的方法，以重组枯草芽孢杆菌为出发菌株，建立OD、酶活反馈调控发酵机制，经种子培养后转入发酵罐进行枯草杆菌高密度发酵生产D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶，在发酵期间通过OD的变化、酶活增量反馈调节控制发酵过程中的风量、转速和补料速度，获得操作简单、菌体密度高、酶活效价高的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶制备方法，发酵结束菌OD600＝100‑110，酶活200‑210UmL。

主权项：1.一种重组枯草芽孢杆菌高密度发酵生产DPE的方法，第一步，培养重组枯草芽孢杆菌，获得种子液，包括：A、一级种子培养：将重组枯草芽孢杆菌按1％的接种量接种在一级种子培养基中，35℃摇瓶培养，转速为220rpmmin；B、二级种子培养：一级种子发酵液的OD600＝2.5-3.0时，按1％的接种量接入装有二级种子培养基的二级种子罐中，控制反应温度35℃，DO40-50％，转速为200rpmmin，pH7.0，通风比为1VVM，发酵罐罐压为0.04Mpa，培养8h，OD600＝3.5-4，获得二级种子罐菌种；第二步，将第一步获得的种子液接种到发酵罐营养液中；第三步，建立OD、酶活反馈调控发酵机制，制得发酵液；第四步，将第三步所得发酵液进行离心、离交，得到D-阿洛酮糖3-差向异构酶液体；其特征在于，第三步，建立OD、酶活反馈调控发酵机制：①产酶前阶段：当发酵4h时，菌OD600＝14-15，补料速率为10-11mlLh；发酵4-8h期间，根据每4h菌OD600增量调节补料速率：OD600增量在10-15，调节流加补料速率15-17mlLh；OD600增量大于15，补料速率降低，调至12-14mlLh；OD600增量小于10，增加补料速率，调至18-20mlLh；②产酶阶段：发酵8h至发酵32h为产酶期，根据每8h菌OD600增量与酶活增量来调节补料速率，当酶活增量数值是OD600增量的2.5-3.0倍时，流加补料速率6-8mlLh；大于3.0倍时，流加补料速率3-5mlLh；小于2.5倍时，流加补料速率10-12mlLh；此阶段结束时，菌OD600＝90-95，酶活为190-195UmL；③产酶末期：发酵32h至36h产酶量减少，每2h菌OD600增量5-10，酶活增量8-10UmL，流加补料速率3-5mlLh；发酵结束，菌OD600＝100-110，酶活为200-210UmL；将250g葡萄糖、5g七水硫酸镁、10mLPTM1微量元素混合，用水定容至750mL，灭菌，作为补料流加。

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