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申请/专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
摘要：一种鸡卵白蛋白OVA表达系统载体构建方法，通过引入CMV启动子，基因重组构建形成携带有CMV启动子与OVA目的片段的pPICZαA载体，通过载体线性化与电转化，将CMV启动子与OVA目的片段整合到毕赤酵母染色体组中，获得含有CMV启动子与OVA目的片段的阳性重组酵母菌株，通过高密度发酵收获酵母菌体，制备破壁OVA菌粉。将OVA菌粉用作水产饲料添加剂，实现防病抗病效果，提高养殖成活率。
主权项：1.一种鸡卵白蛋白OVA表达系统载体构建方法，具体步骤包括：（1）利用Trizol法提取鸡卵白蛋白OVA的RNA；（2）将鸡卵白蛋白OVA的RNA反转录形成cDNA；（3）SERPINB14扩增鸡卵白蛋白OVA、载体构建；①先进行引物设计，使用PhantaMaxSuper-FidelityDNAPolymerase对鸡卵白蛋白OVA进行扩增，再利用ClonExpressUltraOneStepCloningKit连接克隆载体pCE-Zero测序；②通过反向PCR扩增获得含有CMV启动子的pPICZαA线性化载体，以及获得带有同源臂的OVA目的片段，进行引物设计，使用ClonExpressUltraOneStepCloningKit试剂盒将pPICZaA线性化载体与片段无缝连接；（4）目标载体在酵母中诱导表达并纯化；将成功构建的目标载体线性化整合到酵母染色体组，并通过抗性筛选获得含CMV启动子的OVA阳性高产菌株；（5）OVA阳性高产菌株的规模化发酵生产；对OVA阳性高产菌株的高密度发酵，通过发酵液高速离心获得OVA酵母菌体，经烘干、超微粉碎，得到破壁OVA菌粉，实现规模化生产。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 江苏亢钧生物科技有限公司 一种鸡卵白蛋白OVA表达系统载体构建方法及其应用
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