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申请/专利权人：云南中烟工业有限责任公司
摘要：本发明公开了一种鉴定烟草突变体的HRM方法，该HRM反应体系的构建方法是针对烟草突变群体，从扩增片段长度、染料种类和染料浓度、DNA模板浓度、引物浓度四个方面研究是否能对单碱基差异的突变体进行分型。每20μL反应体系中包括：DNA模板浓度为80～100ngμL、EvaGreenDye染料0.4μL、0.3μmolL的正向和反向引物，剩余ddH2O补齐。本发明的HRM体系，具有灵敏性和简便性，在添加饱和染料的PCR产物中直接进行高分辨率熔解曲线的采集，且PCR体系成分的存在不会影响荧光信号采集，检测结果中几乎不出现假阳性；高通量、成本低，检测方法便捷；适用于大规模分子辅助育种的生产实践中。
主权项：1.一种鉴定烟草突变体的HRM反应体系的构建方法，其特征在于，针对烟草突变群体，从扩增片段长度、染料种类和染料浓度、DNA模板浓度、引物浓度四个方面研究是否能对单碱基差异的突变体进行分型，包括以下步骤：1扩增片段长度：设置包含SNP位点的扩增子长度依次为201bp，283bp，430bp，506bp，599bp，763bp，801bp，839bp；2引物浓度：设置为0.1μmolL、0.3μmolL、0.5μmolL、0.7μmolL、0.9μmolL，所述引物浓度为0.3μmolL～0.5μmolL；3DNA模板浓度：设置为20ngμL、40ngμL、80ngμL、100ngμL；4染料的种类：分别使用非饱和染料SYBRGreenI和饱和染料20×EvaGreenDyeBiotium,Hayward,USA，检测两种染料对HRM熔解曲线信号采集的影响；5染料的浓度：染料添加用量依次为0.2μL、0.4μL、0.6μL、0.8μL。
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权利要求：
百度查询： 云南中烟工业有限责任公司 一种鉴定烟草突变体的HRM方法
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