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申请/专利权人：吉林农业大学
申请日：2023-10-09
公开（公告）日：2024-01-09
公开（公告）号：CN117363573A
主分类号：C12N5/0793
分类号：C12N5/0793
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.01.26#实质审查的生效;2024.01.09#公开
摘要：本发明属于鱼类原代细胞分离和培养技术领域，具体涉及一种乌鳢下丘脑神经元原代细胞的分离和培养方法。本发明提供的方法使用酶消化法配合差速贴壁法，降低了剔除小体积乌鳢下丘脑覆膜和血管的精细操作，利用差速贴壁法去除了难以剥离的覆膜和血管，从而获得高纯度的贴壁乌鳢下丘脑神经元细胞；本发明提供的方法得到的乌鳢原代下丘脑神经元细胞的纯度高、细胞状态好、贴壁美观、传代周期短。
主权项：1.一种乌鳢下丘脑神经元原代细胞的分离和培养方法，其特征是，包括以下步骤：步骤1，将乌鳢浸泡于75％酒精中消毒，剪开乌鳢脑室，剪断脊髓，翻出大脑腹面，用镊子夹出垂体两侧的两瓣下丘脑至于DPBS中清洗去血液等杂质；步骤2，将清洗后的下丘脑转移至AIM消毒液中使用精细镊子剥离大部分下丘脑覆膜和血管组织，而后转移至新的AIM中室温下静置消毒；步骤3，将消毒后的下丘脑置于Ⅰ型胶原酶消化液中剪碎，置于慢速摇床上室温消化，随后加入原代细胞培养液终止消化；步骤4，将消化结束的下丘脑组织细胞混合液转移至离心管中吹吸打散组织块，而后离心弃去上清，用原代培养液重悬接种于六孔板中；步骤5，使用差速贴壁法获得贴壁的乌鳢下丘脑神经元细胞，在含二氧化碳培养箱中培养21d，得到乌鳢下丘脑神经元原代细胞。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 吉林农业大学 一种乌鳢下丘脑神经元原代细胞的分离和培养方法
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