申请/专利权人：江苏大学

申请日：2020-09-07

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN112280831B

主分类号：C12Q1/6825

分类号：C12Q1/6825;G01N33/53;G01N27/327;G01N27/416

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2021.02.23#实质审查的生效;2021.01.29#公开

摘要：本发明属于生物传感器技术领域，涉及一种基于DNAwalker的电化学生物传感器的制备方法及其应用；首先将DNAwalker‑AFB1适配体与发夹DNA1、发夹DNA2混合，滴加到金电极表面，反应后再滴加MCH，经常温孵育得到电化学生物传感器；然后，在其表面修饰AFB1，锚定探针1、短链DNA1和短链DNA2的混合液，浸入亚甲基蓝溶液，通过测定传感器电流值，与AFB1浓度构建得到标准曲线；最后通过测定未知样品的电流值，代入构建的标准曲线，即可实现未知样品中AFB1的检测；本发明以极少量的目标物AFB1可以进行双重信号放大，得到更大的亚甲基蓝电化学信号，检测选择性好、速度快、灵敏度高。

主权项：1.一种基于DNAwalker的电化学生物传感器检测黄曲霉毒素B1的用途，其特征在于，步骤如下：（1）首先将DNAwalker溶液和AFB1适配体溶液混合，得到的混合溶液于一定温度的水浴条件下进行反应，水浴反应后冷却至室温，得到DNAwalker-AFB1适配体溶液；所述DNAwalker溶液的浓度为0.1μM，AFB1适配体溶液的浓度为0.15μM；所述水浴条件的温度为90-95℃，反应时间为5min；（2）取步骤（1）制备的DNAwalker-AFB1适配体溶液与发夹DNA1溶液和发夹DNA2溶液混合，得到混合溶液，记为混合溶液A，混合溶液A中DNAwalker-AFB1的最终浓度为0.1μM，所述发夹DNA1的最终浓度为5μM，发夹DNA2的最终浓度为5μM；取混合溶液A滴加到Au电极表面，固定反应一段时间；依靠DNA末端修饰的-SH，利用Au-S键结合作用力，将三种DNA链固定在电极表面；然后再将巯基己醇滴加到Au电极表面，常温孵育一段时间，得到基于DNAwalker的电化学生物传感器；（3）取多个上述步骤中已经构建的电化学生物传感器，在其表面分别修饰不同浓度V1体积的AFB1溶液，常温孵育一段时间，得到已完成识别检测的电化学生物传感器界面；一个浓度的AFB1溶液对应修饰一个电化学生物传感器，浓度和电化学生物传感器呈一一对应关系；（4）然后，将锚定探针1溶液、短链DNA1溶液、短链DNA2溶液混合，得到混合溶液B，再取混合溶液B分别修饰到步骤（3）中已完成识别检测的电化学生物传感器表面进行反应；反应后，将电化学生物传感器分别浸泡在亚甲基蓝溶液中，浸泡一段时间，得到浸泡处理的电化学生物传感器；（5）用三电极体系：Au工作电极，Pt对电极，AgAgCl参比电极，在CHI852D电化学工作站上选择交流伏安法检测步骤（4）中浸泡处理的电化学生物传感器界面的电流，传感器表面由于吸附的大量亚甲基蓝，交流伏安法测量表面吸附的亚甲基蓝在氧化还原过程中产生的电流强度；电流强度与AFB1溶液的浓度正相关，每一个浓度的AFB1会对应一个电流值，根据电流值和AFB1浓度的对数构建得到标准曲线；（6）样品中AFB1的检测：将样品处理后得到样品液，修饰V1体积的样品液于传感器表面，常温孵育后按照步骤（4）进行操作，然后测定电流值；将电流值代入步骤（5）构建的标准曲线，即可获知样品中AFB1的浓度；实现未知样品中黄曲霉毒素B1检测的用途。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏大学 一种基于DNA walker的电化学生物传感器的制备方法及其应用

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