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申请/专利权人：吉林大学
申请日：2023-11-28
公开（公告）日：2024-04-26
公开（公告）号：CN117924442A
主分类号：C07K14/325
分类号：C07K14/325;C12N15/10;A01N63/50;A01P7/04
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.05.14#实质审查的生效;2024.04.26#公开
摘要：一种基于蛋白定向进化的BT毒蛋白，属于虫害防治生物技术领域。本发明的目的是针对玉米螟钙黏蛋白的BT毒蛋白（Cry3Aa），能够更高效的抑制并杀灭玉米螟，应用于转基因作物和农药制剂中的基于蛋白定向进化的BT毒蛋白。本发明毒蛋白在SEQIDNO.1所示的氨基酸序列中，具有下述的一个或多个氨基酸位置上的氨基酸取代：第20位、第136位、第215位、第374位。本发明专门针对玉米螟BT毒蛋白（Cry3Aa）受体钙粘蛋白进行进化，如果应用于玉米转基因，将极大地提高抗虫效率。
主权项：1.一种基于蛋白定向进化的BT毒蛋白，其特征在于：毒蛋白的构建过程是：1构建载体：SP-Cry3AaS2208，AP-PnCadS2060；2将MP质粒转化到AP-PnCadS2060，构建为MPAP-PnCadS2060；3用SP-Cry3AaS2208制备初始噬菌体，培养6h以上，离心上清即gIII缺陷型M13噬菌体，用于PACE系统开展；4用MPAP-PnCadS2060制备初始宿主菌；5系统装配：①将40mL宿主菌转移至chemostat瓶中，启动蠕动泵1，吸取培养基至chemostat瓶中，调整废液针至80mL处，保持chemostat瓶中液面维持在80mL处；②Lagoon瓶内加15mL宿主菌，并加入终浓度～107pfumL的噬菌体，调整废液针至15mL处；③准备注射泵，注射器装满250mM阿拉伯糖，排尽管内空气，将注射器安装在注射泵上，将注射泵连接到Lagoon瓶；④将所有废液连接到废液桶中，连接蠕动泵，打开各蠕动泵和注射泵；⑤每日取样，计算噬菌体滴度，当噬菌体浓度低于1*104时，适量补充噬菌体以稳定系统运行，样品留存，测序；⑥当系统运行至144h起，发现噬菌体滴度逐渐增长，说明Cry3Aa已经产生了有益的突变；⑦经测序验证，发现突变积累。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 吉林大学 基于蛋白定向进化的BT毒蛋白
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