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申请/专利权人：伊犁川宁生物技术股份有限公司
申请日：2021-09-07
公开（公告）日：2024-06-04
公开（公告）号：CN114107237B
主分类号：C12N9/04
分类号：C12N9/04;C12N9/06;C12N1/21;C12N15/53;C12R1/19
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.04#授权;2022.03.18#实质审查的生效;2022.03.01#公开
摘要：本发明提供了一种发酵生产鹅去氧胆酸氧化酶的方法，通过原始菌种大肠杆菌二级培养发酵，并结合异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖吡喃糖苷以下简称IPTG诱导，制备得到酶活较高的7α‑羟基类固醇脱氢酶和维生素B2还原酶，可进一步用于酶法制备7‑酮石胆酸7K‑LCA，降低生产成本，工业应用前景良好。
主权项：1.一种发酵生产鹅去氧胆酸氧化酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）制备种子：将重组大肠杆菌接种至摇瓶培养基培养，得到摇瓶种子液；所述重组大肠杆菌为含有表达鹅去氧胆酸氧化酶的外源基因的BL21DE3大肠杆菌；所述表达鹅去氧胆酸氧化酶的外源基因序列如SEQIDNO.1所示；所述重组大肠杆菌具体是将SEQIDNO.1所示的外源基因序列插入PET-28A+大肠杆菌蛋白表达载体，将该含有外源基因的载体导入宿主菌株BL21DE3大肠杆菌表达菌株所得；所述培养是在pH6.80-7.20条件下，转速180rmin～220rmin，于33℃～38℃培养6h～15h，直至OD600值到达2.0～3.0；（2）种子罐发酵：将步骤（1）制得的摇瓶种子液接种至种子罐培养得一级种子液；培养温度：33℃~38℃，溶氧量：15%~35%；接种量为1.00%~1.25%，接种量的单位为vv，pH为6.80~7.20，搅拌转速150rmin~350rmin，培养周期：4h~8h；（3）发酵罐发酵：取步骤（2）培养的一级种子液接种至发酵培养基培养；接种量是1.5％～3.0％，接种量的单位为vv，于33℃～38℃，pH6.80～7.20条件下培养，培养4h～6h且10≤OD600≤15时一次性补入IPTG50ppm～100ppm，完成诱导后，控制培养温度在25℃～30℃，培养期间调节空气流量，调整搅拌速度150rmin～350rmin，控制溶氧在20％～35％之间，直至发酵结束。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 伊犁川宁生物技术股份有限公司 一种发酵生产鹅去氧胆酸氧化酶的方法
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