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申请/专利权人：浙江省农业科学院

摘要：本发明公开了一种可繁殖杂合雌性不育恢复系分子选育方法，包括以下步骤：S1：筛选恢复性植株；S2：制备RNAi载体；S3：RNAi载体转化：把RNAi载体转化到恢复系水稻中，抑制不育基因的表达，生产出具有雄性育性的恢复系水稻；S4：恢复系植株评估；S5：筛选母本；S6：分子标记分析；S7：基因克隆和功能验证；S8：基因编辑技术；S9：杂交组合测试：将恢复系与母本进行杂交测试，如获得高育性杂交籼型稻，那么恢复系就可作为CMS水稻的搭配恢复系使用。本发明选育的恢复系雌性不育但雄性可育，制种授粉后无需去除父本，实现制种机械化收割，提高制种效率；且可提高产量和质量、降低育种成本、减少对农药和化肥的依赖。

主权项：1.一种可繁殖杂合雌性不育恢复系分子选育方法，其特征在于，包括以下具体步骤：S1：筛选恢复性植株：从大量的自然种质资源或人工诱导的变异种中筛选出具有两系不育的双不育水稻植株；S2：制备RNAi载体：制备RNAi载体、genome-walking、RAPD和其他分子生物学技术识别RNAi靶向区域，寻找RNAi靶向序列，设计RNAi特异性的引物；S3：RNAi载体转化：把RNAi载体转化到恢复系水稻中，并进行筛选，利用Bt杆菌或农杆菌媒介的转化技术，实现RNAi载体的穿透，针对杂合雄性不育基因区域靶向复制，从而抑制不育基因的表达，生产出具有雄性育性的恢复系水稻；S4：恢复系植株评估：对于产生的具有雄性育性的恢复系植株进行评估，以保证后续杂交质量；S5：筛选母本：从大量的自然种质资源或人工诱导的变异种中筛选出具有雄性不育特征的母本水稻植株；S6：分子标记分析：利用分子标记技术对母本和恢复系进行分子标记分析，通过比较它们的基因组DNA序列，确定与雄性不育和恢复性相关的候选基因；S7：基因克隆和功能验证：对于已经鉴定出的候选基因，采用基因克隆技术将其分离并导入其他植物中进行功能验证，观察是否恢复了雄性功能；S8：基因编辑技术：利用基因编辑技术直接对候选基因进行定点突变或修饰，以验证其在CMS和恢复性中的功能；S9：杂交组合测试：将已经验证的恢复系与雄性不育母本进行杂交组合测试，如果恢复系成功恢复了雄性功能，获得高育性的杂交籼型稻，产生了正常的有精子的花粉，那么这个恢复系就可以作为CMS水稻的搭配恢复系使用，从而实现生产上的广泛应用和推广。

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