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申请/专利权人：西北农林科技大学
申请日：2024-04-16
公开（公告）日：2024-06-07
公开（公告）号：CN118147223A
主分类号：C12N15/84
分类号：C12N15/84;C12N15/11;C12N15/29;A01H5/00;A01H6/34
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.06.25#实质审查的生效;2024.06.07#公开
摘要：本发明公开了一种通过基因编辑ClMS188创制西瓜雄性不育种质的方法，属于植物基因工程技术领域。本发明公开的一种通过基因编辑ClMS188创制西瓜雄性不育种质的方法，通过CRISPRCas9基因编辑技术对西瓜ClMS188进行基因编辑，使该基因功能缺失，从而产生隐性细胞核雄性不育的表型。通过本发明方法创制的西瓜雄性不育系与正常的材料相比，除了雄花育性发生改变外，其他组织如根、茎、叶、卷须、雌花、果实、种子、生长势等都无可见表型变化。如果将创制的雄性不育新种质用于杂交种子生产将大幅度降低人工成本，提高制种效率，具有重要的生产应用潜力。
主权项：1.一种通过基因编辑ClMS188创制西瓜雄性不育种质的方法，其特征在于，具体步骤如下：1根据ClMS188的基因组DNA序列分别在ClMS188的外显子1和外显子2上设计靶点，命名为Target1和Target2；2构建CRISPRCas9双靶点敲除载体；①利用限制性内切酶BsaI-HF对CRISPRCas9载体pBSE402进行酶切，回收酶切后的载体pBSE402；②以中间载体pCBC-DT1T2为模板，利用引物Target1-FTarget2-R进行PCR扩增，回收目的片段；③将步骤①酶切后的载体pBSE402与步骤②回收的目的片段进行同源重组，转化DH5α感受态；④将步骤③得到的菌落进行鉴定并把条带大小正确的菌落接菌、摇菌、抽提重组质粒进行测序，将测序正确的重组质粒转化至农杆菌EHA105感受态中；3西瓜遗传转化；经过浸染、共培养、恢复培养、选择培养、芽伸长培养和生根培养阶段得到基因编辑植株并进行表型观察。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 西北农林科技大学 一种通过基因编辑ClMS188创制西瓜雄性不育种质的方法
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