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申请/专利权人：西北农林科技大学
申请日：2024-03-27
公开（公告）日：2024-06-18
公开（公告）号：CN118207241A
主分类号：C12N15/82
分类号：C12N15/82;C12N15/55;C12N5/04;A01H5/00;A01H6/20
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.18#公开
摘要：本发明公开了一种快速创制高光效油菜种质的方法，涉及油菜高光效育种技术领域，其技术要点为：包含以下步骤：提取蓝藻的DNA；获得FBPase的片段；构建超表达载体；鉴定阳性单克隆；转化农杆菌GV3101；转化甘蓝型油菜中双11号；获得T1代转基因阳性单株；小孢子培养。通过以上步骤，将蓝藻里边的卡尔文循环途径的关键基因转到油菜中，以此来提高油菜光合利用效率，再通过小孢子培养快速获得纯合的高光效的油菜新种质，提高油菜产量。
主权项：1.一种快速创制高光效油菜种质的方法，其特征是：包括以下步骤：S1、提取蓝藻的DNA：通过CTAB的方法提取蓝藻的DNA；S2、获取FBPase的片段：以蓝藻DNA中的FBPase的基因核苷酸序列作为参考序列，利用PrimerPremier5软件设计引物，以蓝藻的DNA作为模板，用DNA聚合酶对参考序列进行PCR扩增，将获得的蓝藻FBPase片段使用通用型DNA纯化回收试剂盒进行回收；S3、构建超表达载体：用限制性内切酶XbaI和KpnI对质粒1300-Dsred进行双酶切处理，然后用DNA纯化回收试剂盒对酶切后的载体进行纯化回收；将所述载体和片段分子量按1:3进行连接，后在37℃温度下培养30min，然后转化大肠杆菌DH5α；S4、鉴定阳性单克隆：采用目的基因FBPase的引物对单菌落进行菌落PCR鉴定，获得超表达质粒；S5、转化农杆菌GV3101：将所述质粒转化到农杆菌感受态GV3101pSoup-p19中；S6、转化甘蓝型油菜中双11号：通过农杆菌介导的下胚轴转化法转化甘蓝型油菜中双11号的下胚轴，获得转基因苗子，所述转基因苗子为转基因T1代植株；S7、获得T1代转基因阳性单株：通过基因FBPase的引物对转基因T1代植株进行阳性鉴定；S8、小孢子培养：将通过及鉴定的T1代转基因阳性单株的花蕾进行小孢子培养，通过秋水仙素加倍，获得纯合的转基因阳性单株。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 西北农林科技大学 一种快速创制高光效油菜种质的方法
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