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申请/专利权人：菏泽学院
申请日：2021-12-09
公开（公告）日：2024-06-07
公开（公告）号：CN114107339B
主分类号：C12N15/54
分类号：C12N15/54;C12N9/12;C12N15/11;C12N15/62;C12N15/70;C07K16/40;C07K16/06;G01N33/569;G01N33/573
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.07#授权;2022.03.18#实质审查的生效;2022.03.01#公开
摘要：本发明提供了泡桐丛枝植原体胸苷激酶基因的扩增引物，扩增获得了两种基因型；构建了泡桐丛枝植原体胸苷激酶的原核表达载体，诱导表达并纯化获得了6×HisPaWBTDK‑1融合蛋白和6×HisPaWBTDK‑2融合蛋白；以融合蛋白为免疫原免疫兔获得了兔多克隆抗体；该多克隆抗体与PaWBTDK‑1蛋白和PaWBTDK‑2蛋白均可发生免疫反应；借助免疫印迹法、免疫荧光显微镜法、免疫电子显微镜法，证明该多克隆抗体可较好地用于泡桐丛枝植原体及其胸苷激酶表达的检测。本发明为进一步研究植原体增殖致病机理奠定了基础，也为农林生产中检测泡桐丛枝植原体提供了新的技术手段。
主权项：1.泡桐丛枝植原体胸苷激酶多克隆抗体，其特征在于，是以氨基酸序列如SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示的融合蛋白为免疫原免疫兔获得；所述的免疫原与佐剂混合乳化后进行免疫，分别在第1天、第21天和第35天进行免疫，初次免疫抗原为弗氏完全佐剂+蛋白抗原，后两次免疫抗原为弗氏不完全佐剂+蛋白抗原；所述融合蛋白的制备方法包括以下步骤：（1）将如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示的泡桐丛枝植原体胸苷激酶的基因重组于pET-28a载体的BamHI酶切位点和XhoI酶切位点之间，得到重组载体；（2）将步骤（1）制备的重组载体转入菌株EscherichiacoliBL21DE3中，得到重组菌株；（3）培养步骤（2）制备的重组菌株，通过IPTG诱导表达；（4）目标蛋白的检测与纯化，纯化步骤用到的菌体裂解液和杂蛋白清洗液中加入1%NP-40和0.25%Tween-20。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 菏泽学院 泡桐丛枝植原体胸苷激酶基因引物、基因、融合蛋白、多克隆抗体及其应用
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