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申请/专利权人：上海大学
摘要：本发明涉及生物技术领域，提供了一种利用线虫和人细胞联合验证多巴胺信号通路的方法，基于外源化学品尤其是新污染物环境浓度暴露，对秀丽隐杆线虫的多巴胺调控基因表达情况进行测定，并利用人神经母细胞瘤细胞SK‑N‑SH对信号通路涉及的离子转运及化学酶进行验证，综合利用生物标志物验证化学品对生物体多巴胺神经信号通路的改变。本发明在传统的单一物种基因表达测定方法的基础上，为化学品诱导多物种信号通路的准确性及同源性验证提供了新思路。该方法利用模式生物的快速筛查与人体细胞体外研究相结合，预测化学品诱导的潜在健康风险机制，适合推广使用。
主权项：1.一种利用线虫和人细胞联合验证多巴胺信号通路的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤1、在20℃生化培养箱中培养秀丽隐杆线虫，在长至含卵成虫阶段，使用裂解液将卵裂解到培养基内，并将卵孵育至L1期用于后续实验；步骤2、收集同步化秀丽隐杆线虫，从培养基中收集L1期秀丽隐杆线虫于培养液中，加入环境浓度的新污染物、大肠杆菌菌液，暴露10d；步骤3、收集暴露后秀丽隐杆线虫，进行多巴胺样基因表达测定；步骤4、利用多巴胺样基因突变体进行基因功能验证；步骤5、人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH复苏、传代及化学品暴露，测定与多巴胺信号通路相关细胞钙离子荧光强度；步骤6、加入人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH膜腺苷酸环化酶抑制剂2’,5’-Dideoxyadenosine，DDA，再次测定钙离子浓度，与未添加DDA细胞的钙离子浓度作对比；步骤7、人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH多巴胺基因测定；步骤8、绘制秀丽隐杆线虫-人神经细胞联合模型验证下的多巴胺信号通路图。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 上海大学 一种利用线虫和人细胞联合验证多巴胺信号通路的方法
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