申请/专利权人：合肥工业大学智能制造技术研究院;国家食品安全风险评估中心

申请日：2024-04-10

公开（公告）日：2024-06-14

公开（公告）号：CN118190892A

主分类号：G01N21/64

分类号：G01N21/64;G01N21/31

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.06.14#公开

摘要：一种基于分子印迹调节Co@MOF‑MIP酶活开关的氨基甲酸乙酯三模态检测方法，包括下列步骤：步骤1：测定氨基甲酸乙酯的混合反应溶液在650nm处吸光度值An；步骤2：在365nm波长激发下，测定氨基甲酸乙酯的混合反应溶液在440nm处荧光强度值Fn；步骤3：测定氨基甲酸乙酯的混合反应溶液在660nm激光照射下的温度Tn：步骤4：构建氨基甲酸乙酯浓度的线性回归方程；步骤5：取待测样品，重复步骤1、步骤2和步骤3获得比色模式吸光度信号、荧光模式的荧光强度信号以及光热模式的温度信号Tn。Co@MOF‑MIP纳米酶的合成工艺相对简单，原料易得且成本较低，不需要复杂的工艺和昂贵的设备，具有较高的稳定性，同时具有高过氧化物酶活性和荧光特性，满足了后续多模态检测EC的需要。

主权项：1.一种基于分子印迹调节Co@MOF-MIP酶活开关的氨基甲酸乙酯三模态检测方法，其特征在于：包括下列步骤：步骤1：测定含有不同浓度的氨基甲酸乙酯的混合反应溶液在650nm处吸光度值An，并用安装了ColorPickerApp的智能手机收集比色信号，将其转化为RGB值，记录为比色模式下的BRnC：将20.0μL的不同浓度的氨基甲酸乙酯标准品溶液、10.0μL的浓度为1.0mgmL的Co@MOF-MIP纳米酶溶液、10.0μL的浓度为20.0mmolL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液和20.0μL的浓度为2.0mmolL的H2O2在离心管中混合，然后加入pH值为3.8-4.2的HAc-NaAc缓冲液并定容至200.0μL，反应14.0-18.0min后移至比色皿中，用紫外分光光度计测量650nm处吸光度值，记为吸光度值An。接着，用安装了ColorPickerApp的智能手机捕捉溶液的比色信号，将其转化为RGB值，记录BRnC；步骤2：在365nm波长激发下，测定含有不同浓度的氨基甲酸乙酯的混合反应溶液在440nm处荧光强度值Fn，并用安装了ColorPickerApp的智能手机收集荧光信号，将其转化为RGB值，记录为荧光模式下的BRnF：将20.0μL的不同浓度的氨基甲酸乙酯标准品溶液、10.0μL的浓度为1.0mgmL的Co@MOF-MIP纳米酶溶液、10.0μL的浓度为20.0mmolL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液和20.0μL的浓度为2.0mmolL的H2O2在离心管中混合，然后加入pH值为3.8-4.2的HAc-NaAc缓冲液并定容至200.0μL，反应14.0-18.0min后移至荧光比色皿中，在365nm波长激发下，用荧光分光光度计测量440nm处的荧光强度值，记为荧光值Fn；接着在365nm波长激发下，用安装了ColorPickerApp的智能手机捕捉溶液的荧光信号，将其转化为RGB值，记录BRnF；步骤3：测定含有不同浓度的氨基甲酸乙酯的混合反应溶液在660nm激光照射下的温度Tn：将20.0μL的不同浓度的氨基甲酸乙酯标准品溶液、10.0μL的浓度为1.0mgmL的Co@MOF-MIP纳米酶溶液、10.0μL的浓度为20.0mmolL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液和20.0μL的浓度为2.0mmolL的H2O2在离心管中混合，然后加入pH值为3.8-4.2的HAc-NaAc缓冲液并定容至200.0μL，反应14.0-18.0min后用660nm激光照射后并使用便携式光热成像仪测量温度数值，记为温度值为Tn；步骤4：构建氨基甲酸乙酯浓度与比色模式下吸光度An、BRnC，荧光模式下的Fn、BRnF以及光热模式下的温度Tn的线性回归方程：根据氨基甲酸乙酯系列浓度的标准品测试获得吸光度信号An和BRnC，构建线性方程，An＝XCEC+y和BRnC＝XCEC+y，其中CEC为氨基甲酸乙酯标准品浓度；根据氨基甲酸乙酯系列浓度的标准品测试获得荧光强度信号Fn和BRnF，构建线性方程，Fn＝XCEC+y和BRnF＝XCEC+y，其中CEC为氨基甲酸乙酯标准品浓度；根据氨基甲酸乙酯系列浓度的标准品测试获得温度信号Tn，构建线性方程，Tn＝XCEC+y，其中CEC为氨基甲酸乙酯标准品浓度；步骤5：取待测样品，重复步骤1、步骤2和步骤3获得比色模式吸光度信号An和BRnC、荧光模式的荧光强度信号Fn和BRnF以及光热模式的温度信号Tn，将An和BRnC、Fn和BRnF和Tn代入相应的线性方程，获得待测样品中的氨基甲酸乙酯的浓度。

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