申请/专利权人：天津大学

申请日：2024-05-08

公开（公告）日：2024-06-14

公开（公告）号：CN118185976A

主分类号：C12N15/74

分类号：C12N15/74;C12N15/113;C12N15/31;C12N15/60;C12N15/77;C12P19/12;C12P7/40;C12P7/44;C12R1/01;C12R1/15

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的撤回

法律状态：2024.06.21#发明专利申请公布后的撤回;2024.06.14#公开

摘要：本发明公开了一种三菌人工光合混菌系统的构建方法，包括：步骤S1，将Ptho、cscB、Trbcl进行融合，并与pSI‑SPE进行连接，将形成的重组表达载体1；步骤S2，将Pcpc560、pal、Trbcl进行融合，并与pSI‑SPE进行连接，形成的重组表达载体2；步骤S3，通过重组表达载体1和重组表达载体2分别得到蔗糖分泌菌株7942‑cscB与反式肉桂酸生产菌株7942‑PAL；步骤S4，将基因catB上下游同源臂片段进行融合，基因phdR上下游同源臂片段进行融合，并分别与pk18mobrpsl进行连接，得到重组表达载体3和重组表达载体4；步骤S5，通过重组表达载体3和重组表达载体4得到顺式粘康酸生产菌株Cgb‑CP。仅依靠光照和CO2，不需要额外添加有机碳源进行顺式粘康酸的生物合成。

主权项：1.一种三菌种人工光合混菌系统的构建方法，其特征在于，包括：步骤S1，将茶碱诱导型启动子Ptho、大肠杆菌W蔗糖转运蛋白基因cscB、终止子Trbcl进行融合，并与表达载体pSI-SPE进行连接，将形成的重组表达载体1；步骤S2，将强启动子Pcpc560、拟南芥苯丙氨酸裂解酶基因pal、终止子Trbcl进行融合，并与表达载体pSI-SPE进行连接，形成的重组表达载体2；步骤S3，将重组表达载体1与重组表达载体2分别转入聚球藻7942中，分别得到蔗糖分泌菌株7942-cscB与反式肉桂酸生产菌株7942-PAL；步骤S4，将基因catB上下游同源臂片段进行融合，基因phdR上下游同源臂片段进行融合，并分别与表达载体pk18mobrpsl进行连接，得到重组表达载体3和重组表达载体4；步骤S5，将重组表达载体3和重组表达载体4依次转入谷氨酸棒状杆菌13032中，得到顺式粘康酸生产菌株Cgb-CP；步骤S6，以聚球藻7942与谷氨酸棒状杆菌13032单独培养的培养基NBG与CG12为基础衍生出四种测试培养基M1、M2、M3和M4；步骤S7，分别将得到蔗糖分泌菌株7942-cscB、反式肉桂酸生产菌株7942-PAL和顺式粘康酸生产菌株Cgb-CP在四种测试培养基中的生长与生产情况综合分析，得到最适合三菌人工光合混菌系统的最佳培养基为M4；步骤S8，分别在30°C、32°C、34°C和37°C条件下，使用NBG和M4培养基分别对两种聚球藻7942基因工程菌和谷氨酸棒状杆菌13032基因工程菌进行培养，检测菌体的生长及蔗糖、反式肉桂酸和顺式粘康酸产量，得到最佳培养温度为32°C；步骤S9，选择M4培养基和最佳培养温度32°C作为构建条件，进而建立三菌人工光合混菌系统。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 天津大学 一种三菌人工光合混菌系统的构建方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD