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申请/专利权人：中国药科大学

摘要：本发明涉及巨型病毒或巨型噬菌体来源的氨酰tRNA合成酶tRNA正交体系构建方法以及正交体系。该构建方法包括：对现有巨型病毒及巨型噬菌体的基因组进行分析并选择一组候选氨酰tRNA合成酶；搜寻原核细胞内候选配对tRNA，或者搜寻真核细胞内候选配对tRNA；在预设原核宿主中将候选氨酰tRNA合成酶与原核细胞内候选配对tRNA分别配对检测正交性，获得原核正交体系；或者，在预设真核宿主中将候选氨酰tRNA合成酶与真核细胞内候选配对tRNA分别配对检测正交性，获得真核正交体系。本发明构建方法能构建获得巨型病毒或巨型噬菌体来源的氨酰tRNA合成酶tRNA正交体系，可作为引入非天然氨基酸的工具。

主权项：1.一种巨型病毒或巨型噬菌体来源的氨酰tRNA合成酶tRNA正交体系构建方法，其特征是，包括以下步骤：第一步、对现有巨型病毒及巨型噬菌体的基因组进行分析，并从中选择一组来源于巨型病毒或巨型噬菌体的候选氨酰tRNA合成酶；第二步、搜寻原核细胞内候选配对tRNA，或者搜寻真核细胞内候选配对tRNA；第二步中，在搜寻前，根据第一步所得候选氨酰tRNA合成酶的多肽序列构建生物进化树，并判断是否有候选氨酰tRNA合成酶接近真核生物或古生菌、或者接近细菌；若有候选氨酰tRNA合成酶接近真核生物或古生菌，则判断该候选氨酰tRNA合成酶在原核细胞中具有正交可能性；若有候选氨酰tRNA合成酶接近细菌，则判断该候选氨酰tRNA合成酶在真核细胞中具有正交可能性；第二步中，在搜寻原核细胞内候选配对tRNA时，搜寻目标包括：第一步涉及的所有或部分巨型病毒、或者所有或部分巨型噬菌体，所述部分巨型病毒或部分巨型噬菌体的宿主或潜在宿主，含有与预定候选氨酰tRNA合成酶序列类似的氨酰tRNA合成酶的微生物；其中，所述部分巨型病毒为含有候选氨酰tRNA合成酶、且该候选氨酰tRNA合成酶在原核细胞中具有正交可能性的巨型病毒；所述部分巨型噬菌体为含有候选氨酰tRNA合成酶、且该候选氨酰tRNA合成酶在原核细胞中具有正交可能性的巨型噬菌体；所述预定候选氨酰tRNA合成酶有至少一个，且选自在原核细胞中具有正交可能性的候选氨酰tRNA合成酶；第二步中，在搜寻真核细胞内候选配对tRNA时，搜寻目标包括：第一步涉及的所有或部分巨型病毒、或者所有或部分巨型噬菌体，所述部分巨型病毒或部分巨型噬菌体的宿主或潜在宿主，含有与预定候选氨酰tRNA合成酶序列类似的氨酰tRNA合成酶的微生物；其中，所述部分巨型病毒为含有候选氨酰tRNA合成酶、且该候选氨酰tRNA合成酶在真核细胞中具有正交可能性的巨型病毒；所述部分巨型噬菌体为含有候选氨酰tRNA合成酶、且该候选氨酰tRNA合成酶在真核细胞中具有正交可能性的巨型噬菌体；所述预定候选氨酰tRNA合成酶有至少一个，且选自在真核细胞中具有正交可能性的候选氨酰tRNA合成酶；第二步中，在判断氨酰tRNA合成酶是否与预定候选氨酰tRNA合成酶序列类似时，采用生物大分子序列比对搜索工具BLAST进行比对并按预设条件进行鉴别；第二步中，搜寻过程包括：在搜寻目标的基因组数据中搜寻并获取与候选氨酰tRNA合成酶对应的候选配对tRNA；第三步、在预设原核宿主中，将候选氨酰tRNA合成酶与原核细胞内候选配对tRNA分别配对，检测其正交性，并获得原核正交体系；或者，在预设真核宿主中，将候选氨酰tRNA合成酶与真核细胞内候选配对tRNA分别配对，检测其正交性，并获得真核正交体系。

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百度查询： 中国药科大学 巨型病毒或巨型噬菌体来源氨酰tRNA合成酶/tRNA正交体系构建方法及正交体系