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申请/专利权人：郭晓贺;冯元
申请日：2022-05-25
公开（公告）日：2024-06-18
公开（公告）号：CN114958736B
主分类号：C12N5/0775
分类号：C12N5/0775;A61L27/38
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.18#授权;2024.05.31#专利申请权的转移;2022.09.16#实质审查的生效;2022.08.30#公开
摘要：本发明提供了一种乳牙牙髓干细胞hDPSC凋亡囊泡制备方法和其在牙髓再生中的应用主要成分为：乳牙牙髓、α‑MEM培养基、星胞菌素Staurosporine、PluronicF‑127凝胶。该具有诱导牙髓再生功能的凋亡囊泡制备方法包括：分离培养hDPSCs，诱导凋亡，提取凋亡囊泡并利用制备为具有缓释功能凝胶。本发明提取乳牙牙髓干细胞凋亡囊泡hDPSC‑ApoVs并制备为缓释凝胶，目前已利用hDPSC‑ApoVs凝胶成功在临床前动物模型中再生出了具有良好生物学结构的牙髓样组织。本发明原创性地建立了hDPSC‑ApoVs凝胶的制备方法，为临床牙髓坏死提供了无细胞治疗的新策略，拥有有良好的应用前景。
主权项：1.乳牙牙髓干细胞凋亡囊泡在制备牙髓组织再生材料中的应用，其特征在于，该牙髓组织再生材料包含0.2mgmL的hDPSC-ApoVs凝胶；hDPSC-ApoVs凝胶的制备方法，包括以下步骤：步骤1：分离培养hDPSC获取临床患儿乳牙牙髓，采用胶原酶消化法分离培养hDPSC；步骤2：诱导hDPSC凋亡，提取hDPSC-ApoVs步骤201：使用含有0.5μMStaurosporine凋亡诱导液培养细胞12h，诱导hDPSC凋亡；步骤202：收集凋亡细胞上清液于15mL离心管中，4℃，800g离心10min去除细胞碎片，进而吸取上清液，4℃，1600g离心30min获得hDPSC-ApoVs沉淀；步骤203：然后使用PBS缓冲液重悬沉淀，4℃，1600g离心30min清洗hDPSC-ApoVs；步骤3：采用BSA蛋白定量分析检测hDPSC-ApoVs浓度；步骤4：制备hDPSC-ApoVs凝胶利用hDPSC-ApoVs的PBS悬液与适量PluronicF-127混合，获得浓度为0.2mgmL的hDPSC-ApoVs凝胶；步骤5：将hDPSC-ApoVs凝胶装载于注射器中，于4℃冷藏；所述的hDPSC-ApoVs包括粒径在1-5μm之间的凋亡小体与粒径＜1μm的凋亡微囊泡。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 郭晓贺;冯元 乳牙牙髓干细胞凋亡囊泡的制备方法和应用
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