申请/专利权人：北京起源聚禾生物科技有限公司

申请日：2024-03-21

公开（公告）日：2024-06-18

公开（公告）号：CN117925874B

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/19;C12R1/22;C12R1/385;C12R1/37;C12R1/46;C12R1/445;C12R1/725

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.18#授权;2024.05.14#实质审查的生效;2024.04.26#公开

摘要：本发明公开了一种检测尿路感染病原微生物、耐药基因的引物探针组合及试剂盒，病原微生物包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、屎肠球菌、粪肠球菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母菌；耐药基因包括CTX‑M‑1、CTX‑M‑9、SHV、TEM、CMY‑2、KPC、NDM、VIM、IMP、OXA‑48、OXA‑23、vanA、vanB、mecA和mecC；上述引物探针序列如SEQIDNO:1~78所示，探针用于熔解曲线分型。本发明的引物探针具有高特异性和灵敏度、耗时短、检测位点覆盖全面等优点，可为临床医生提供辅助诊断参考，提早进行治疗，临床应用广泛。

主权项：1.检测尿路感染病原微生物、耐药基因的引物探针组合，适用于高分辨率熔解曲线分析，其特征在于，所述病原微生物包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、屎肠球菌、粪肠球菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母菌，检测引物和探针的核苷酸序列如下：大肠埃希菌检测引物EC-F:SEQIDNO:1，大肠埃希菌检测引物EC-R:SEQIDNO:2，大肠埃希菌检测探针EC-P:SEQIDNO:3；肺炎克雷伯菌检测引物KPN-F:SEQIDNO:4，肺炎克雷伯菌检测引物KPN-R:SEQIDNO:5，肺炎克雷伯菌检测探针KPN-P:SEQIDNO:6；铜绿假单胞菌检测引物PA-F:SEQIDNO:7，铜绿假单胞菌检测引物PA-R:SEQIDNO:8，铜绿假单胞菌检测探针PA-P:SEQIDNO:9；奇异变形杆菌检测引物PM-F:SEQIDNO:10，奇异变形杆菌检测引物PM-R:SEQIDNO:11，奇异变形杆菌检测探针PM-P:SEQIDNO:12；阴沟肠杆菌检测引物ECC-F:SEQIDNO:13，阴沟肠杆菌检测引物ECC-R:SEQIDNO:14，阴沟肠杆菌检测探针ECC-P:SEQIDNO:15；鲍曼不动杆菌检测引物AB-F:SEQIDNO:16，鲍曼不动杆菌检测引物AB-R:SEQIDNO:17，鲍曼不动杆菌检测探针AB-P:SEQIDNO:18；屎肠球菌检测引物EFM-F:SEQIDNO:19，屎肠球菌检测引物EFM-R:SEQIDNO:20，屎肠球菌检测探针EFM-P:SEQIDNO:21；粪肠球菌检测引物EFS-F:SEQIDNO:22，粪肠球菌检测引物EFS-R:SEQIDNO:23，粪肠球菌检测探针EFS-P:SEQIDNO:24；无乳链球菌检测引物GBS-F:SEQIDNO:25，无乳链球菌检测引物GBS-R:SEQIDNO:26，无乳链球菌检测探针GBS-P:SEQIDNO:27；金黄色葡萄球菌检测引物SA-F:SEQIDNO:28，金黄色葡萄球菌检测引物SA-R:SEQIDNO:29，金黄色葡萄球菌检测探针SA-P:SEQIDNO:30；白色假丝酵母菌检测引物CA-F:SEQIDNO:31，白色假丝酵母菌检测引物CA-R:SEQIDNO:32，白色假丝酵母菌检测探针CA-P:SEQIDNO:33；其中，所述探针的核苷酸序列5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团；上述至少6种病原微生物的检测引物和探针置于一管中供样本检测，一管中同一Tm值范围内不同病原微生物检测探针标记的荧光基团不同；所述耐药基因包括CTX-M-1、CTX-M-9、SHV、TEM、CMY-2、KPC、NDM、VIM、IMP、OXA-48、OXA-23、vanA、vanB、mecA和mecC，检测引物和探针的核苷酸序列如下：CTX-M-1检测引物CTX-M-1-F:SEQIDNO:34，CTX-M-1检测引物CTX-M-1-R:SEQIDNO:35，CTX-M-1检测探针CTX-M-1-P:SEQIDNO:36；CTX-M-9检测引物CTX-M-9-F:SEQIDNO:37，CTX-M-9检测引物CTX-M-9-R:SEQIDNO:38，CTX-M-9检测探针CTX-M-9-P:SEQIDNO:39；SHV检测引物SHV-F:SEQIDNO:40，SHV检测引物SHV-R:SEQIDNO:41，SHV检测探针SHV-P:SEQIDNO:42；TEM检测引物TEM-F:SEQIDNO:43，TEM检测引物TEM-R:SEQIDNO:44，TEM检测探针TEM-P:SEQIDNO:45；CMY-2检测引物CMY-2-F:SEQIDNO:46，CMY-2检测引物CMY-2-R:SEQIDNO:47，CMY-2检测探针CMY-2-P:SEQIDNO:48；KPC检测引物KPC-F:SEQIDNO:49，KPC检测引物KPC-R:SEQIDNO:50，KPC检测探针KPC-P:SEQIDNO:51；NDM检测引物NDM-F:SEQIDNO:52，NDM检测引物NDM-R:SEQIDNO:53，NDM检测探针NDM-P:SEQIDNO:54；VIM检测引物VIM-F:SEQIDNO:55，VIM检测引物VIM-R:SEQIDNO:56，VIM检测探针VIM-P:SEQIDNO:57；IMP检测引物IMP-F:SEQIDNO:58，IMP检测引物IMP-R:SEQIDNO:59，IMP检测探针IMP-P:SEQIDNO:60；OXA-48检测引物OXA-48-F:SEQIDNO:61，OXA-48检测引物OXA-48-R:SEQIDNO:62，OXA-48检测探针OXA-48-P:SEQIDNO:63；OXA-23检测引物OXA-23-F:SEQIDNO:64，OXA-23检测引物OXA-23-R:SEQIDNO:65，OXA-23检测探针OXA-23-P:SEQIDNO:66；vanA检测引物vanA-F:SEQIDNO:67，vanA检测引物vanA-R:SEQIDNO:68，vanA检测探针vanA-P:SEQIDNO:69；vanB检测引物vanB-F:SEQIDNO:70，vanB检测引物vanB-R:SEQIDNO:71，vanB检测探针vanB-P:SEQIDNO:72；mecA检测引物mecA-F:SEQIDNO:73，mecA检测引物mecA-R:SEQIDNO:74，mecA检测探针mecA-P:SEQIDNO:75；mecC检测引物mecC-F:SEQIDNO:76，mecC检测引物mecC-R:SEQIDNO:77，mecC检测探针mecC-P:SEQIDNO:78；其中，所述探针的核苷酸序列5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团；上述至少6种耐药基因的检测引物和探针能置于一管中供样本检测，一管中同一Tm值范围内不同耐药基因检测探针标记的荧光基团不同。

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