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申请/专利权人：桂林优利特医疗电子有限公司
申请日：2024-03-14
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN118222595A
主分类号：C12N15/70
分类号：C12N15/70;C12N15/62;C07K19/00;C07K1/22;G01N33/68;G01N33/52;G01N33/58;C12R1/19
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.21#公开
摘要：本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种精子抗原表位串联表达重组蛋白的制备及验证方法，本方法将精子表面抗原中与生育密切相关的两个抗原SP17和SPACA1串联表达，将SP17抗原1‑151及SPACA1胞外区域30‑221段，通过柔性接头串联起来重组至PGEX‑4T‑2质粒，转化Origami菌株，低温15℃诱导表达GST‑SP17‑SPACA1融合蛋白，采用本发明的培养基，可获得可溶性融合蛋白，产量可达45mgL，凝血酶酶切去掉标签蛋白后，可获得可溶性目的蛋白，产量达25mgL，纯度达95％，纯化得到的SP17‑SPACA1蛋白包被Elisa平板，采用30例临床阳性血清验证，阳性检出率可达93.33％，阴性样本检测正确率达90％，从而解决了现有的检测方式灵敏度偏低的问题。
主权项：1.一种精子抗原表位串联表达重组蛋白的制方法，其特征在于，包括以下步骤：基于人精子抗原SP17氨基酸序列和人精子抗原SPACA1氨基酸序列选择对应氨基酸序列；将所述对应氨基酸序列进行串联并在末尾加入8个组氨酸；构建pGEX-4T-2-SP17-SPACA1重组表达质粒；将所述表达质粒转化大肠杆菌中进行处理优化；通过GST柱纯化得到GST-SP17-SPACA1融合蛋白，并采用凝血酶酶切标签蛋白，验证酶切完全后通过Ni柱亲和纯化一步获得目的蛋白。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 桂林优利特医疗电子有限公司 一种精子抗原表位串联表达重组蛋白的制备及验证方法
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