申请/专利权人：沃臻生物科技(佛山)有限公司

申请日：2024-03-06

公开（公告）日：2024-06-28

公开（公告）号：CN118256535A

主分类号：C12N15/70

分类号：C12N15/70;C12N15/12;C07K14/47;C12N15/65;C12N1/21;C12N15/11;C07K1/14;C07K1/22;C07K1/34;C07K1/36;C12R1/19

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.06.28#公开

摘要：本发明公开了一种表达MouseSPO11蛋白特定结构域的方法，其包括以下步骤：以包含MouseSPO11蛋白序列为模板，然后设计引物进行PCR扩增，得到PCR扩增后的MouseSPO11基因片段；在Alp_PET_StHis_SUMO空载体中，在多克隆位点的N端依次设计了StreptagII亲和标签、8xhis亲和标签和SUMO促溶标签；将所述PCR扩增后的MouseSPO11基因片段进行凝胶电泳，然后进行切胶回收，然后与所述表达载体Alp_PET_StHis_SUMO同时进行BamHI和EcoRI双酶切，然后进行切胶回收，连接，转化，菌落PCR，菌落培养，质粒提取，得到构建成功的质粒；将所述质粒进行诱导表达，得到表达后菌液；将所述表达后菌液进行纯化，得到所述MouseSPO11蛋白特定结构域。本发明能够表达MouseSPO11蛋白特定结构域，并得到高纯度的MouseSPO11蛋白。

主权项：1.一种表达MouseSPO11蛋白特定结构域的方法，其特征在于，其包括以下步骤：以包含MouseSPO11蛋白序列为模板，然后设计引物进行PCR扩增，得到PCR扩增后的MouseSPO11基因片段；在Alp_PET_StHis_SUMO空载体中，在多克隆位点的N端依次设计了StreptagII亲和标签、8xhis亲和标签和SUMO促溶标签，得到表达载体Alp_PET_StHis_SUMO；将所述PCR扩增后的MouseSPO11基因片段进行凝胶电泳，然后进行切胶回收，然后与所述表达载体Alp_PET_StHis_SUMO同时进行BamHI和EcoRI双酶切，得到双酶切后片段和双酶切后载体；将所述双酶切后片段和双酶切后载体进行切胶回收，然后使用T4连接酶进行连接，得到连接产物，所述双酶切后片段摩尔量与所述双酶切后载体摩尔量之比为4～6：1；将所述连接产物全部转化至DH5α感受态中，转化后将转化产物全部涂在终浓度为30～70μgmL的Kana抗性LB固体平皿上，得到连接单菌落；将所述连接单菌落进行菌落PCR，然后接种于浓度为30～70μgmL的Kana抗性LB液体培养基中进行菌落培养，得到PCR菌液，将所述PCR菌液进行质粒提取，然后进行测序，结果正确后得到构建成功的质粒；将所述质粒进行诱导表达，得到表达后菌液；将所述表达后菌液进行纯化，得到所述MouseSPO11蛋白特定结构域。

全文数据：

权利要求：

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