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申请/专利权人：南通大学
申请日：2024-04-16
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN118222701A
主分类号：C12Q1/6883
分类号：C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12Q1/6851;G01N33/68;C12N15/85;C12N15/12
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.21#公开
摘要：本发明提供一种鉴定N4BP1核糖内切酶活性的EGFP报告系统的开发和应用，涉及生物医学技术领域，利用改造后的EGFP荧光蛋白鉴定N4BP1的内切酶活性。通过实验，发现确定了N4BP1降解靶基因FosC的核心序列，将此序列连接到EGFP的mRNA的C端，构建成新EGFP‑mRNA序列。N4BP1过表达质粒共表达在HEK293T细胞，然后比较荧光信号的强度就可以判断N4BP1的内切酶活性。改造后的EGFP，由于连接了N4BP1识别的靶序列，EGFP的表达量会N4BP1酶活力的多少进行改变。通过检测EGFP的强度，就能判断N4BP1蛋白的量及酶活性。因此，N4BP1的GFP报告系统可以用于检测N4BP1的酶活力。由于N4BP1基因在免疫、炎症及肿瘤中发挥关键作用。该细胞可以检测相关疾病细胞中N4BP1的核糖内切酶活性。
主权项：1.一种检测N4BP1内切酶活性检测靶点的构建方法，其特征在于：包含以下步骤：S1：构建质粒；S2：设计实验：具体的，在N4BP1缺陷型和野生型小鼠中，构建了银屑病模型，通过对病变皮肤的转录组测序和RT-PCR分析以获得N4BP1调控银屑病的潜在靶点；然后通过将潜在靶点共同克隆在表达载体上，使用RT-PCR与Westernblot分析证实N4BP1可以有效抑制潜在靶点；然后判断潜在靶点响应N4BP1的片段；S3：验证结果：使用潜在靶点响应N4BP1的片段与N4BP1共表达，如果N4BP1抑制片段的表达则进一步缩短目标区域，并重复S1和S2的步骤，直到获得最终靶序列；如果N4BP1未能抑制片段的表达，则获得结论。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南通大学 一种鉴定N4BP1核糖内切酶活性的EGFP报告系统的开发和应用
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