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申请/专利权人：山西大学
申请日：2024-03-06
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN118222639A
主分类号：C12N15/89
分类号：C12N15/89;A01K67/033;C12N15/113;C12N15/55;C12N9/22
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.21#公开
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种飞蝗LmCDA2纯合突变体及其制备方法、RNP复合物和应用，一种制备飞蝗LmCDA2纯合突变体的方法，包括以下步骤：S1，构建LmCDA2基因敲除RNP复合物，其包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：T7启动子，LmCDA2基因敲除靶点和tracRNA‑crRNA转录而成的sgRNA，Cas9蛋白；S2，将步骤S1所述的LmCDA2基因敲除RNP复合物共转新鲜飞蝗卵，孵化，得G0代，发育至3龄若虫时通过PCR及测序，从G0代飞蝗中筛选出G0代突变体，将G0代与野生型杂交得到G1代，发育至3龄若虫时通过PCR及测序，从G1代飞蝗中筛选出G1代突变体；S3，将步骤S2得到的G1代突变体自交，得到G2代，从G2代飞蝗中筛选出G2代突变体，即为飞蝗LmCDA2纯合突变体。本发明通过CRISPRCas9技术，首次构建并获得了飞蝗LmCDA2纯合突变体，该突变体卵期浆膜表皮的形成和功能被显著，且导致其在卵期死亡，致死率为100％。
主权项：1.一种制备飞蝗LmCDA2纯合突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，构建LmCDA2基因敲除RNP复合物，其包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：T7启动子，LmCDA2基因敲除靶点和tracRNA-crRNA转录而成的sgRNA，Cas9蛋白；S2，将步骤S1所述的LmCDA2基因敲除RNP复合物共转新鲜飞蝗卵，孵化，得G0代，发育至3龄若虫时通过PCR及测序，从G0代飞蝗中筛选出G0代突变体，将G0代与野生型杂交得到G1代，发育至3龄若虫时通过PCR及测序，从G1代飞蝗中筛选出G1代突变体；S3，将步骤S2得到的G1代突变体自交，得到G2代，从G2代飞蝗中筛选出G2代突变体，即为飞蝗LmCDA2纯合突变体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 山西大学 一种飞蝗LmCDA2纯合突变体及其制备方法、RNP复合物和应用
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