申请/专利权人：德国癌症研究中心

申请日：2018-09-19

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN111492056B

主分类号：C12N15/00

分类号：C12N15/00

优先权：["20170919 EP 17191829.5","20180917 US PCT/US18/51381"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.21#授权;2024.06.11#专利申请权的转移;2020.08.28#实质审查的生效;2020.08.04#公开

摘要：本发明涉及用于基因疗法、离体细胞疗法、干细胞疗法，更特别是用于改善载体编码的抗原或治疗基因表达的自复制非整合型附加体型脊椎动物表达载体的领域。这样的重组DNA分子可用于生物技术、转基因生物、基因疗法、干细胞疗法、治疗性疫苗接种、农业和DNA疫苗。更具体地，涉及包含至少一种启动子和SMAR元件的多核苷酸，其中所述SMAR元件位于所述启动子的下游，并且其中所述SMAR元件的核酸序列SMAR序列在至多200个核苷酸的片段上每100个核苷酸包含至少3个序列基序ATTASEQIDNO：1；本发明还涉及包含所述多核苷酸的组合物和宿主细胞，以及涉及用于医学和用于治疗遗传疾病的多核苷酸。本发明还涉及包含所述多核苷酸的试剂盒和装置，以及涉及多核苷酸的方法和用途。

主权项：1.一种用于在靶脊椎动物细胞中提高自复制非整合型附加体型SMAR表达载体的表达和建立效率的方法，其包括以下步骤：a.提供附加体型SMAR表达载体，其包含：i.细菌复制选择区域，其包含细菌复制起点和选择标记；ii.用于在脊椎动物细胞中表达转基因的转录单位，其包含启动子、5’UTR、转基因和3’UTR；iii.位于所述3’UTR内的SMAR插入物；和b.修饰附加体型SMAR表达载体，使得SMAR在所述3’UTR内侧面为5’剪接供体位点和3’剪接受体位点，从而得到的自复制非整合型附加体型SMAR表达载体提高了脊椎动物细胞转染后的表达和建立效率；其中侧面为5’剪接供体位点和3’剪接受体位点的所述SMAR的序列选自SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23；其中所述细菌复制起点是其序列选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3和SEQIDNO:4的R6Kγ复制起点；其中所述选择标记的序列选自SEQIDNO:5、SEQIDNO:6和SEQIDNO:7；以及其中包含细菌复制起点和选择标记的所述细菌复制选择区域是R6K起点-RNA-OUTRNA选择标记细菌复制选择区域，其序列选自SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16和SEQIDNO:17。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 德国癌症研究中心 用于细胞的遗传修饰的非整合型DNA载体

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