申请/专利权人：上海大格生物科技有限公司

申请日：2023-03-01

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN116334209B

主分类号：C12Q1/6883

分类号：C12Q1/6883;C12Q1/6886;C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93

优先权：["20230106 CN 2023100209355"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.21#授权;2023.07.14#实质审查的生效;2023.06.27#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种病理切片上原位基因检测的产品及其用途，所述产品包括经过修饰的切口酶、靶向突变位点的引导RNA、RCA扩增试剂、荧光报告系统；所述经过修饰的切口酶无核酸内切酶活性，所述荧光报告系统中包括荧光染料修饰的核酸探针，所述核酸探针的个数为两个以上，两个核酸探针中的荧光染料之间能发生FRETresonanceenergytransfer。本发明的检测产品能够快捷且可视化地对多种疾病以及肿瘤中包括可能由新冠病毒COVID‑19引起或伴发的上述疾病存在的致病基因表达情况进行检测，具有高灵敏度、高特异性的特点，应用前景广泛。

主权项：1.一种基于CRISPR技术的病理切片原位基因检测的产品，其特征在于，所述产品中包括经过修饰的切口酶或其编码基因、靶向突变位点的引导RNA或其编码基因、RCA扩增试剂以及荧光报告系统，所述经过修饰的切口酶无核酸内切酶活性，所述经过修饰的切口酶为将切口酶与5'端连接有醛基的寡核苷酸连接后获得的切口酶；5'端连接有醛基的寡核苷酸中适于与PadlockDNA结合以形成环状DNA；所述5'端连接有醛基的寡核苷酸含有与所述PadlockDNA的两端互补的片段；5'端连接有醛基的寡核苷酸的核苷酸序列如SEQIDNO.21所示；所述切口酶为Cas蛋白；所述引导RNA为sgRNA；所述sgRNA覆盖突变点且与突变型靶向序列匹配；所述经过修饰的切口酶能与靶向突变位点的引导RNA形成切口酶-引导RNA复合体；所述RCA扩增试剂包括PadlockDNA；PadlockDNA的核苷酸序列如SEQIDNO.22所示；所述荧光报告系统中包括荧光染料修饰的核酸探针，所述核酸探针的个数为两个，两个核酸探针中的荧光染料之间能发生FRET，所述核酸探针特异识别PadlockDNA；所述核酸探针中包含有与PadlockDNA匹配的特异性片段，所述核酸探针的核苷酸序列如SEQIDNO.23、SEQIDNO.24所示。

全文数据：

权利要求：

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