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申请/专利权人：武汉大学
申请日：2021-12-10
公开（公告）日：2024-06-25
公开（公告）号：CN114350662B
主分类号：C12N15/113
分类号：C12N15/113;C12N15/115;C12N15/85;C12N15/55;G01N21/84
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.25#授权;2022.05.03#实质审查的生效;2022.04.15#公开
摘要：本发明公开了一种基于CRISPR的多色、正交、高灵敏度的RNA成像方法，属于RNA成像技术领域。本发明基于Cas13sgRNA和适配子，设计了插入具有重复结构适配子的sgRNA‑适配子，利用其与的dCas13b的结合，建立了一种多色、高效、正交的RNA成像方法。本发明的设计提高了sgRNA‑适配子的稳定性，并在不影响靶向性的前提下提高信噪比，实现低丰度RNA的成像和RNA相互作用的可视化。本发明具有普适性，可针对不同靶标RNA设计spacer序列进行荧光成像；本发明在进行多靶标多色成像时，只需一种dCas13b蛋白和几种sgRNA‑适配子，减少了蛋白设计成本和相关的实验操作。
主权项：1.一种sgRNA-适配子，其特征在于：包括Cas13sgRNA和插入在Cas13sgRNA的茎环结构中的具有重复结构的适配子；所述的Cas13sgRNA的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述的sgRNA-适配子的设计为：将Cas13sgRNA的茎环结构5’-AGUU|UUGA-3’拆分后，插入互补配对支架序列连接适配子的发卡结构；具有重复结构的适配子的重复结构之间插入互补配对支架序列使多个适配子折叠形成正确结构；所述sgRNA-适配子选自序列如SEQIDNO.10或15所示的sgRNA-适配子。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 武汉大学 基于CRISPR的多色、正交、高灵敏度的RNA成像方法
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