申请/专利权人：江南大学

申请日：2022-06-17

公开（公告）日：2024-06-25

公开（公告）号：CN114874967B

主分类号：C12N1/21

分类号：C12N1/21;C12N15/70;C12N15/55;C12N15/54;C12N15/60;C12N15/61;C12N15/53;C12N15/56;C12N15/31;C12P19/26;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.25#授权;2022.08.26#实质审查的生效;2022.08.09#公开

摘要：本发明公开了一种产N‑乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌及其构建方法，属于代谢工程和基因工程技术领域。本发明构建的重组大肠杆菌Escherichiacoli是由大肠杆菌BL21DE3为出发菌株，通过在基因组上敲除nanATEK基因,nagABE基因、manXYZ基因、poxB基因，并引入外源的UDP‑N‑乙酰氨基葡糖‑2‑差向异构酶编码基因NeuC和N‑乙酰神经氨酸合酶编码基因NeuB，并且重组表达由诱导型启动子T7调控的内源酶glmM，glmU和glmS突变体glmSA而得到的一株产N‑乙酰神经氨酸的重组菌株，其产量达到3.85gL，为工业化生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。

主权项：1.一种产N-乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌，其特征在于，沉默或缺失了大肠杆菌基因组中的N-乙酰葡糖胺-6-磷酸脱乙酰酶基因nagA、氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶基因nagB、N-乙酰氨基葡萄糖特异性EIICBA组分基因nagE、N-乙酰神经氨酸裂解酶基因nanA、唾液酸转运蛋白基因nanT、N-乙酰甘露糖胺-6-磷酸2-差向异构酶基因nanE、N-乙酰甘露糖胺激酶基因nanK、甘露糖特异性EIIAB组分相关基因manXYZ、丙酮酸氧化酶poxB基因，并表达来源于脑膜炎奈瑟菌（Neisseriameningitidis）的UDP-N-乙酰氨基葡糖-2-差向异构酶NeuC和来源于粘放线菌（Moritellaviscosa）的N-乙酰神经氨酸合酶NeuB，并表达内源酶glmM、glmU和葡萄糖胺合酶突变体glmSA；所述葡萄糖胺合酶突变体glmSA整合于原nagABE所在位置；所述NeuC整合于原甘露糖特异性EIIAB组分相关基因manXYZ所在位置；所述NeuB整合于原丙酮酸氧化酶poxB基因所在位置；所述葡萄糖胺合酶突变体glmSA的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示；利用SEQIDNO.10所示启动子表达所述N-乙酰神经氨酸合酶NeuC；所述glmM，glmU和glmS突变体glmSA由诱导型启动子T7调控表达。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江南大学 一种产N-乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌及其构建方法

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