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申请/专利权人：内蒙古医科大学
申请日：2023-06-29
公开（公告）日：2024-06-28
公开（公告）号：CN118256539A
主分类号：C12N15/74
分类号：C12N15/74;C12N15/90;C12N15/31;C12N1/21;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/01
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.28#公开
摘要：本发明属于基因工程技术领域，具体为bvfA基因缺失株M5‑90△bvfA及其构建和应用，本发明成功构建了布鲁氏菌M5‑90△bvfA基因缺失株，可用于制备成区分自然感染和疫苗免疫的预防布鲁氏菌病的产品，较原始布鲁氏菌M5‑90的毒性减弱，安全性高，且因bvfA基因的缺失，使用该产品后动物没有产生针对该基因产生的抗体，因此只需要检测动物血液有无抗bvfA基因的抗体，有则为自然感染，无则为疫苗感染。
主权项：1.bvfA基因缺失株M5-90△bvfA的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、根据布鲁氏菌M5-90序列设计bvfA基因的上游同源重组手臂的核苷酸序列、下游同源重组手臂的核苷酸序列；根据pKD4质粒上Kan抗性基因序列、上游同源重组手臂的核苷酸序列以及下游同源重组手臂的核苷酸序列设计并合成打靶片段△bvfA::Kan；S2、将S1获得的打靶片段△bvfA::Kan克隆入自杀质粒pCVD442，获得打靶质粒pCVD442-△bvfA::Kan；S3、将S2获得打靶质粒pCVD442-△bvfA::Kan、转化于大肠杆菌E.coliβ2155，获得供体菌β2155pCVD442-△bvfA::Kan，β2155pCVD442-△bvfA::Kan供体菌与布鲁氏菌M5-90受体菌进行接合，至单克隆形成，得到bvfA基因被Kan抗性基因取代的克隆，命名为M5-90△bvfA。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 内蒙古医科大学 bvfA基因缺失株M5-90△bvfA及其构建和应用
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