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申请/专利权人：自然资源部第三海洋研究所

摘要：本发明涉及一种基于褐菖鲉评估无对照站位石油类生物毒性效应的方法，包括以下步骤：1采用海区原位监测实验，设置若干个监测站位；2将体长、体重基本一致的健康褐菖鲉用网框悬挂于不同监测站位；3监测持续14天，在最后一天观察褐菖鲉存活情况、取存活褐菖鲉的肝、胆、性腺组织进行生理生化检测；4将海洋石油类生物毒性效应分为五级；5基于各分子生物标志物的分级系数和综合生物标志物响应指数均值得出一至三级的分级阈值；6分析评估无对照站位的海洋石油类生物毒性效应风险等级。本发明具有方法简便，原材料来源广、成本低、易操作、效应显著等优点，是定量评价海洋石油类污染对海洋生物和生态系统安全的一个重要工具，具有广阔的应用前景。

主权项：1.基于褐菖鲉评估无对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，包括以下步骤：1采用海区原位监测实验，设置若干个监测站位；2将体长、体重基本一致的健康褐菖鲉置于套有尼龙网的塑料筐中，用绳子悬挂于不同监测站位的标记物上，没入海平面至少1m；3监测持续14天，并在最后一天观察褐菖鲉存活情况，取存活褐菖鲉的肝、胆、性腺组织进行生理生化检测；所述生理生化检测包括肝体比、性体比、肝7-乙氧基异吩恶唑-O-脱乙基酶活性、胆汁萘类代谢物含量、胆汁菲类代谢物含量、胆汁芘类代谢物含量、胆汁苯并[a]芘类代谢物含量；4根据个体、组织指标和分子生物标志物响应情况，将海洋石油类生物毒性效应分为五级：若某一监测站位出现褐菖鲉非外伤死亡且存活褐菖鲉中出现组织或分子水平的指标响应的，评为五级；若某一监测站位出现褐菖鲉组织水平的指标响应但未有死亡的，评为四级；若某一监测站位褐菖鲉未有个体或组织水平的指标响应而仅有分子生物标志物响应的，评级区间为一至三级，基于各分子生物标志物的分级系数和值进行划分；所述生物毒性效应分为5级具体包括：第一级，为无风险等级，意味着生物体未受到石油类的污染；第二级，为低风险等级，意味着生物体在分子水平对石油类污染的响应程度轻微；第三级，为中风险等级，意味着生物体在分子水平对石油类污染的响应程度加剧，但尚未引起生物体组织水平的响应；第四级，为高风险等级，意味着生物体在组织水平出现了对石油类污染的响应，但尚未引起生物死亡；第五级，为极高风险等级，意味着生物体在个体水平出现了对石油类污染的响应，开始死亡；所述值的算法为：1对于每一种分子生物标志物，首先将各站位分子生物标志物平均值xi，所有站位上的总平均值和标准差s，按式1进行均一化处理：式1中x’i为xi经均一化后的值；2对于5种分子生物标志物，均令Zi＝x’i2；3令|xmin|＝所有站位中该分子生物标志物均一化数值最小值的绝对值，每个站位该分子生物标志物的得分为Bi＝Zi+|xmin|3；4绘制星状图并计算面积：将某站位上每种分子生物标志物的Bi值大小以星状图中的辐射线长度表示，某站位的IBR值通过计算星状图面积得到，星状图面积即图中由相邻分子生物标志物的辐射线围成的三角形面积Ai之和，即式5中，α为相邻两条辐射线的夹角，星状图中最后一条辐射线与第一条辐射线重合；5将每个站位的5种分子生物标志物在星状图上进行不重复排列，分别计算出每种排列方式下的IBR值，并将所有排列方式的IBR取平均值作为该站位的值；所述一至三级的分级阈值的算法为：1定义各分子生物标志物的分级系数：所述5种分子生物标志物即肝7-乙氧基异吩恶唑-O-脱乙基酶活性、胆汁萘类代谢物含量、胆汁菲类代谢物含量、胆汁芘类代谢物含量、胆汁苯并[a]芘类代谢物含量的一级分级系数均为1.2，二级分级系数均为2.0；所述的值的算法对各分子生物标志物的分级系数进行计算，得到一级分级阈值为0.34，二级分级阈值为8.49；当监测站位值小于一级分级阈值0.34时，该监测站位海洋石油类生物毒性效应风险等级为一级；当监测站位值大于等于一级分级阈值0.34且小于二级分级阈值8.49时，该监测站位海洋石油类生物毒性效应风险等级为二级；当监测站位值大于等于二级分级阈值8.49时，该监测站位海洋石油类生物毒性效应风险等级为三级。

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