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申请/专利权人：江南大学

摘要：本发明公开了一种MK‑7高产菌的筛选方法，属于微生物育种技术领域。本发明通过组合使用ARTP诱变和原生质体融合技术，结合六种结构类似物抗性特征进行菌株筛选。本发明选择的六种结构类似物抗性特征，能够快速的帮助筛选到高产MK‑7的目的菌株。经过两轮育种最终得到一株同时具有磺胺胍、1‑羟基‑2‑萘甲酸、甲萘醌、2‑脱氧‑D‑葡萄糖、利福平抗性和β‑氟丙酮酸敏感型的菌株，并且该菌的MK‑7产量得到大幅提升。该菌在摇瓶发酵6d后的MK‑7产量达到了73.57±1.61mgL，相比出发菌株H.β.D.R.‑5提升了1.36倍。

主权项：1.一种MK-7高产菌的筛选方法，其特征在于，对原始菌株进行ARTP诱变和原生质体融合，并采用磺胺胍抗性、1-羟基-2-萘甲酸抗性、甲萘醌抗性、2-脱氧-D-葡萄糖抗性、利福平抗性和β-氟丙酮酸敏感型遗传特征进行选育，得到MK-7高产菌株，所述原始菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）H.β.D.R.-5；所述方法包括如下步骤：S1、将原始菌株培养至对数期后，采用ARTP诱变，诱变后采用结构类似物抗性平板进行初筛，再使用摇瓶发酵进行复筛，分别筛选得到一株具有磺胺胍抗性的MK-7产量较高的菌株、一株具有1-羟基-2-萘甲酸抗性的MK-7产量较高的菌株和一株具有甲萘醌抗性的MK-7产量较高的菌株；S2、将S1步骤筛选得到的三株菌株进行原生质体融合，并筛选得到一株同时具有磺胺胍抗性、1-羟基-2-萘甲酸抗性和甲萘醌抗性的MK-7产量较高的菌株；S3、将S2步骤筛选得到的菌株培养至对数期后，采用ARTP诱变，诱变后采用结构类似物抗性平板进行初筛，再使用摇瓶发酵进行复筛，分别筛选得到一株具有2-脱氧-D-葡萄糖抗性的MK-7产量较高的菌株、一株具有利福平抗性的MK-7产量较高的菌株和一株具有β-氟丙酮酸敏感型的MK-7产量较高的菌株；S4、将S3步骤中筛选得到的三株菌株进行原生质体融合，并筛选得到一株同时具有磺胺胍抗性、1-羟基-2-萘甲酸抗性、甲萘醌抗性、2-脱氧-D-葡萄糖抗性、利福平抗性和β-氟丙酮酸敏感型遗传特征的MK-7高产菌株。

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百度查询： 江南大学 一种MK-7高产菌的筛选方法