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申请/专利权人：上海应用技术大学
摘要：本发明涉及一种新型酰胺酶显色底物及其合成方法与应用，该合成方法包括以下步骤：步骤S1、在圆底烧瓶中加入I结构化合物氨噻肟酸与有机溶剂，缓慢滴加氯酰化剂，加毕，控温反应得到含有氨噻肟酰氯的黄色澄清溶液II；步骤S2、将反应液置于旋转蒸发仪中，以蒸发除去溶剂，生成黄色流状液体，向黄色流状液体中加入5‑氨基‑2‑硝基苯甲酸与丙酮，充分搅拌后，控温并滴加有机碱或无机碱，继续保温反应，反应结束后旋蒸除去溶剂，加入适量蒸馏水充分搅拌，用酸化剂调节pH，析出黄色固体，混匀离心，通过常规的过滤、洗涤与干燥得到目标产物III。本发明在酶活定量与筛选中具有灵敏度高、准确性好的优势；不需要终止剂，其具有步骤简单与反应温和等优点。
主权项：1.一种酰胺酶显色底物的合成方法，其特征在于，该合成方法包括以下步骤：步骤S1、首先，在圆底烧瓶中加入I结构化合物氨噻肟酸与有机溶剂，然后，控温0-5℃下，缓慢滴加氯酰化剂，加毕，控温反应1-2h得到含有氨噻肟酰氯的黄色澄清溶液II；步骤S2、首先，将步骤S1的反应液置于旋转蒸发仪中，以蒸发除去溶剂，生成黄色流状液体，然后，向含有氨噻肟酸酰氯的黄色流状液体中加入5-氨基-2-硝基苯甲酸与丙酮，充分搅拌后，控温0-5℃下，滴加有机碱或无机碱，继续保温反应1-3h，反应结束后旋蒸除去溶剂，加入适量蒸馏水充分搅拌，用酸化剂调节pH为2-3，析出黄色固体，混匀离心，最后，通过常规的过滤、洗涤与干燥得到目标产物III；所述酰胺酶显色底物III为（E）-5-（2-（2-氨基噻唑-4-基）-2-（甲氧基亚氨基）乙酰氨基）-2-硝基苯甲酸，分子式为C13H11N5O6S，分子量为365.32，结构式如下： ；所述步骤S1中，氯酰化剂需在控温0-5℃下，溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，且氯酰化剂与N,N-二甲基甲酰胺的摩尔比为1：（1.1~1.5）；所述步骤S1中的有机溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮与甲苯中的一种或多种混合；所述步骤S1中的氯酰化剂为草酰氯、氯化亚砜、甲磺酰氯中的一种。
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