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申请/专利权人：浙江大学医学院附属第一医院(浙江省第一医院)
摘要：本发明提供双人源肺癌PDX模型及应用，涉及生物医药技术领域。该双人源肺癌PDX模型，其建立的具体步骤包括：步骤一：分离和培养；步骤二：注射；步骤三：验证人类T细胞嵌合；步骤四：原始人源肺癌组织的获取与培育；步骤五：接种PDX肺癌。本发明通过选用重度免疫缺陷小鼠，将人的造血干细胞HSCs移植到小鼠体内，重建人免疫系统。在此基础上，按照PDX模型建立方法，建立双人源PDX模型。采用PD1PD‑L1单抗处理双人源PDX模型小鼠荷瘤，评估疗效，效果显著。
主权项：1.双人源肺癌PDX模型，其特征在于：其建立的具体步骤包括：步骤一：分离和培养：Ficoll密度梯度分离粒细胞集落刺激因子动员的外周血中或脐带血分离PBMC，磁珠分选CD34+人源造血干细胞，在IMDM培养基中扩增1周，每3-4天更换细胞因子；步骤二：注射：1-3dNSG雌性新生小鼠经Cs-137γ辐照器照射350rad，照射2-6h，将适量人HSC注射到NSG小鼠面静脉；步骤三：验证人类T细胞嵌合：人源化8周左右的NSG小鼠经眼眶采血，通过流式分析检测评估外周血单核细胞的小鼠和人类造血细胞嵌合；步骤四：原始人源肺癌组织的获取与培育：1将人源肺癌组织通过传递窗进入SPF动物房，在超净台内操作，倒入适量的PBS和DMEM于冰上的培养皿中，取出组织，放入PBS中初步清洗，剔除坏死和正常组织；将PBS中的组织转移至DMEM中，预留部分组织，将剩余组织剪成20-30mm3的组织小块，使用穿刺针接种于NSG的腋下背部或后腿部，每只最多接种四个部位；将预留的组织进行切片，通过活肿瘤组织冻存试剂盒对组织进行冻存，并存放于液氮；2恶性胸水离心，弃上清，破红2次，含20％FBS的培养基重悬培养及进一步冻存，或用含10％基质胶的PBS重悬，6×107个细胞小鼠接种于NSG小鼠的腋下背部或后腿部，定期观察接种后的小鼠，待肿瘤长至一定大小后再按照方法1进一步处理；步骤五：接种PDX肺癌：将与HSC、HLA相合的人源肺癌植入8-10W的嵌合NSG小鼠的腋下背部或后腿部，定期观察接种后的小鼠。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江大学医学院附属第一医院(浙江省第一医院) 双人源肺癌PDX模型及应用
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