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申请/专利权人：北京生命科技研究院有限公司

摘要：本发明公开了一种同时测定样品中神经递质和烟碱及其代谢物的方法，所述方法基于超高效液相‑质谱联用技术，所述样品为脑微透析液；所述方法包括：I.待测样品采集，II.供试品溶液的制备，III.混合标准品溶液的制备，IV.色谱条件和质谱检测参数的建立，和V.测定；其中，所述标准品优选为烟碱、组A的全部和组B的全部；所述组A由可替宁、降烟碱、降可替宁、烟碱氮氧化物、可替宁氮氧化物、反式‑3’‑羟基可替宁和烟碱糖苷构成，所述组B由多巴胺、左旋多巴、3,4‑二羟基苯乙酸、3‑甲氧基酪胺、5‑羟色胺、5‑羟吲哚乙酸、高香草酸、肾上腺素、去甲肾上腺素、谷氨酸、γ‑氨基丁酸和乙酰胆碱构成。本发明方法不仅可以同时测定多达20种烟酸及其代谢产物及脑内神经递质的含量，而且可以实时测定动物脑内上述物质的含量。

主权项：1.一种同时测定样品中神经递质和烟碱及其代谢物的方法，所述方法基于超高效液相-质谱联用技术，所述样品为脑微透析液；所述方法包括如下步骤：I.待测样品采集I-1.对实验动物进行脑微透析套管埋手术；I-2.给药当日，先将脑微透析探针插入已经预埋在实验动物头部的探针导管内，连通脑透析管路；采用滤过的复方氯化钠注射液灌流，将收集管置于3～4℃环境中，平衡后收集空白脑微透析液；腹腔注射烟碱，继续在3～4℃下收集脑微透析液至给药后6h；收集的脑微透析液即为待测样品；II.供试品溶液的制备每份待测样品在碱性条件下和苯甲酰氯发生衍生化反应，，加入内标，使每种内标的浓度均为5ngmL，得到供试品溶液；III.混合标准品溶液的制备溶解了所有标准品的混标母液在碱性条件下和苯甲酰氯发生衍生化反应，然后加入内标、人工脑脊液和50％vv甲醇水溶液，混合均匀，使各标准品达到规定浓度，每种内标浓度均为5ngmL，且人工脑脊液的体积占比为80％，即得；其中，所述标准品选自烟碱、组A中的至少一种化合物和组B中的至少一种化合物的组合；其中，所述组A由可替宁、降烟碱、降可替宁、烟碱氮氧化物、可替宁氮氧化物、反式-3’-羟基可替宁和烟碱糖苷构成，所述组B由多巴胺、左旋多巴、3,4-二羟基苯乙酸、3-甲氧基酪胺、5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸、高香草酸、肾上腺素、去甲肾上腺素、谷氨酸、γ-氨基丁酸和乙酰胆碱构成；IV.色谱条件和质谱检测参数的建立色谱条件包括：色谱柱：WatersACQUITYUPLCHSS-T3色谱柱，2.1×100mm，1.8μm；流动相A：10mM甲酸铵水溶液，流动相B：0.1％vv甲酸的甲醇溶液，梯度洗脱程序：0～4min，流动相B的体积由0％线性增加到40％，余量为流动相A，4～6min，流动相B的体积由40％线性增加到98％，余量为流动相A，6～7.8min，流动相B的体积保持98％，余量为流动相A，7.8～8min，流动相B的体积迅速由98％减少到0％，余量为流动相A，8～10min，流动相B的体积保持0％，余量为流动相A；流动相流速：0.3mLmin；柱温为：35℃；进样量：1μL；所述质谱检测参数包括：离子源：电喷雾离子源，扫描模式：正或负离子模式，离子源喷雾电压：3.5kV，雾化气体温度：130℃，雾化气气流：11Lmin，雾化器：25psi，鞘气温度：400℃，鞘气流速：12Lmin，分析时间：10min，多反应监测模式；V.测定；其中，所述步骤II和步骤III中，所述内标为所述标准品的氘代物。

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