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申请/专利权人：陕西普罗安蒂生物科技发展有限公司
摘要：本发明公开了一种通过切割融合蛋白制备多肽的方法，通过在融合蛋白中设计多个目的多肽序列，并在目的多肽序列前后分别添加酶切位点和镍辅助化学切割位点以便将目的多肽切割出来。本发明中包涵体先进行镍辅助化学切割后其切割效率不低于90％，其切割后形成的前体多肽由于结构简单、溶解性好等优点，可进行进一步酶切加工，且前体多肽酶切效率不低于90％；本发明方法经两步切割后可直接将包涵体切割成目的多肽，避免了包涵体复性效率低和因目的蛋白串联次数过多导致结构复杂而酶直接切效率低的问题。
主权项：1.一种通过切割融合蛋白制备多肽的方法，其特征在于，融合蛋白的通式为A-B-Xn或A-B-Xn-B，其中，A为前导肽，其序列包含有纯化标签和酶切位点；B为目的多肽；X为连接肽，X的通式为X=E-F-G，其中E的序列为GSHHW或SHHW；F为0~15个氨基酸残基的连接序列，G为肠激酶切割位点；X序列N末端为镍辅助化学切割序列GSHHW；融合蛋白通过表达载体被宿主细胞表达、纯化后，先在镍辅助化学切割液中被化学切割，生成包含目的多肽序列的前体多肽；然后前体多肽在酶切位点对应的酶切缓冲液中进行酶切，将前体多肽通过酶切生成目的多肽；所述融合蛋白的氨基酸残基序列如SEQ.ID.NO.1所示；所述前体多肽的氨基酸残基序列如SEQ.ID.NO.2所示；所述目的多肽的氨基酸残基序列如SEQ.ID.NO.3所示；所述镍辅助化学切割缓冲液中包括：2~6M的盐酸胍、20~100mM的2~环已胺基乙磺酸、50~100mM的丙酮肟、0.5~1.5mM的氯化镍和10~100mM的氯化钠；pH为8.0~9.0；切割温度为25~40℃、切割时间为24~72h。
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