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申请/专利权人：浙江工业大学

摘要：本发明脂多糖诱导的Caco‑2RAW264.7细胞共培养模型的建立方法及应用，包括：1）Caco‑2细胞和RAW264.7细胞的培养；2）将Caco‑2细胞接种于Transwell板上室的AP侧，孵化；3）RAW264.7细胞接种于24孔板，孵化；4）将Transwell上室转移到24孔板；5）将脂多糖溶于PBS中，配制母液，过滤后稀释备用；6）在BL侧加入LPS‑10%DMEM培养基孵化，形成肠道炎症模型。本发明建立了肠上皮细胞系Caco‑2和巨噬细胞系RAW‑264.7细胞的体外模型，以建立肠道炎症反应，用以研究巨噬细胞介导的Caco‑2细胞对C3G纳米脂质体的吸收机制。

主权项：1.脂多糖诱导的Caco-2RAW264.7细胞共培养模型的建立方法，其特征在于，该方法包括以下步骤:1）Caco-2细胞在MEM培养基，RAW264.7细胞在DMEM培养基中分别进行细胞培养；培养条件为pH7.4，5%CO2，37℃，95%空气，恒湿培养21天，培养基每隔1-2天更换一次；MEM培养基中含有20%胎牛血清、1%HEPES、1%NEAA、1%L-谷氨酰胺、1%丙酮酸钠、100UmL青霉素和100mgmL链霉素；DMEM培养基中含有10%胎牛血清、1%HEPES、1%NEAA、1%L-谷氨酰胺、100UmL青霉素和100mgmL链霉素；2）将步骤1）培养结束后的Caco-2细胞以1×105个孔密度接种于24孔Transwell板上室的AP侧，PC膜，4μm，和步骤1）相同的培养条件下孵化21天，每24小时跟换一次培养液；3）RAW264.7细胞以1×105个孔的密度接种于24孔板，和步骤1）相同的培养条件下孵化1天；4）将孵化21天的载有Caco-2细胞的Transwell上室转移到孵化1天的载有RAW264.7细胞的24孔板，此时AP侧为Caco-2细胞，BL侧为RAW264.7细胞；5）将脂多糖溶于PBS中，配置成50μgmL的母液，过0.22μm针孔式过滤器；用10%DMEM培养基稀释成1μgmLLPS-10%DMEM溶液；6）在BL侧加入1μgmL的LPS-10%DMEM培养基孵化3h，用ELISA试剂盒检测AP侧炎症因子浓度，形成肠道炎症模型。

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