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申请/专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所

摘要：本发明公开一种高产西柏三烯一醇产量的工程菌及其构建方法与应用，属于生物技术领域。为了实现高产量、高效率合成西柏三烯一醇，本发明将西柏三烯一醇合成酶基因CBTS2a克隆至表达载体，然后转化到含用MVA途径的GGPP高通量合成途径的工程菌中，得到生产西柏三烯一醇的基因工程菌。进一步通过表达可提高细胞还原力的六磷酸葡萄糖内酯酶，提高了西柏三烯一醇的合成能力。本发明的基因工程菌经发酵培养46h，西柏三烯一醇的产量可高达5073mgL。本发明的基因工程菌可以直接从菌体中获得西柏三烯一醇，具有良好的工业应用潜力。

主权项：1.一种产西柏三烯一醇的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：1表达载体的构建：将乙酰辅酶A酰基转移酶基因羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因mvaE，3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A合酶基因mvaS连接到质粒pET30a+上，得到重组质粒I；六磷酸葡萄糖内酯酶基因pgl、法尼基焦磷酸合成酶基因Erg20，牻牛儿基焦磷酸合成酶基因CrtE，西柏三烯一醇合成酶基因CBTS2a克隆到质粒pACYCDuet-1上得到重组质粒II；2突变菌株构建：将甲羟戊酸激酶基因ERG12、甲羟戊酸-5-磷酸激酶基因ERG8、甲羟戊酸-5-二磷酸脱羧酶基因ERG19和异戊烯焦磷酸异构酶基因IDI1整合至大肠杆菌BL21DE3基因组内，得到含有四个基因的突变菌株I；3重组菌转化：将步骤1所得重组质粒I与重组质粒II共同转化至步骤2所得到的突变菌株I所制备的感受态中，得到用于生产西柏三烯一醇的基因工程菌；所述乙酰辅酶A酰基转移酶羟甲基戊二酰辅酶A还原酶是基因mvaE编码，GenBank登录号为AAG02439.1；所述3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A合酶是基因mvaS编码，GenBank登录号为AAG02438.1；所述甲羟戊酸激酶是基因ERG12编码，GenBank登录号为NM_001182715.1；所述甲羟戊酸-5-磷酸激酶是基因ERG8编码，GenBank登录号为NM_001182727.1；所述甲羟戊酸-5-二磷酸脱羧酶是基因ERG19编码，GenBank登录号为X97557.1；所述异戊烯焦磷酸异构酶是基因IDI1编码，GenBank登录号为NM_001183931.1；所述法尼基焦磷酸合成酶是基因Erg20编码，GenBank登录号为NM_001181600.1；所述牻牛儿基焦磷酸合成酶是基因CrtE编码，GenBank登录号为M87280.1；所述六磷酸葡萄糖内酯酶是基因pgl编码，GenBank登录号为NC_000913.3；所述西柏三烯一醇合成酶是基因CBTS2a编码，基因CBTS2a序列如SEQIDNO.1所示，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

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