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申请/专利权人：福建医科大学附属第一医院

摘要：本发明公开一种用于中药材中赭曲霉毒素A检测的电化学适配体传感器的制备方法，本发明通过运用ExoI辅助适配体均相识别，能够避免溶液中游离适配体和非靶标依赖的弱转换事件的干扰；运用简单的置换策略和PolyT尾修饰的捕获探针能够高效捕获被赭曲霉毒素保护的适配体；采用地高辛标记替代传统的生物素标记避免链霉亲和素修饰的磁珠的非特异性结合，能够提高传感器的检测性能，实现中药材复杂基质中赭曲霉毒A的准确灵敏检测，为中药材外源污染物的有效控制提供技术支撑。

主权项：1.一种用于中药材中赭曲霉毒素A检测的电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）设计探针：所述探针包括能够靶向识别赭曲霉毒素A的适配体和捕获探针，适配体序列为SEQ.ID.NO.1，记为Apt；捕获探针序列为SEQ.ID.NO.2，记为CP；所述的适配体序列SEQ.ID.NO.1为5’-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-3’；所述的捕获探针序列SEQ.ID.NO.2为5’-GATGCTCCCTTTACGCCACCCACACCCGATCTTT-biotin-3’；（2）均相识别：采用步骤（1）所述的Apt与含有赭曲霉毒素A的样品反应，通过ExoI酶切反应，高温变性，冷却至室温，获得被赭曲霉毒素A保护的Apt溶液；（3）磁珠捕获：首先，将步骤（1）所述的捕获探针序列CP固定于链霉亲和素偶联的磁珠MMBs表面，获得CP-MMBs；接着，将步骤（2）所得的被赭曲霉毒素A保护的Apt溶液加入含有CP-MMBs的试管中，旋转，孵育，清洗，获得AptCP-MMBs；（4）TdT延伸反应：配制50μLTdT延伸反应体系并将其加入步骤（2）所得的含有AptCP-MMBs的试管中，室温下反应延伸30min，旋转，孵育，清洗，获得TdT-AptCP-MMBs；其中，所述的50μLTdT延伸反应体系由0.1μL的Dig-11-dUTP，0.3μL的dATP，0.2μL的TdT，5μL的缓冲液，44.4μL的双蒸水组成；（5）HRP结合反应：将anti-Dig-HRP溶液加入步骤（4）所述的TdT-AptCP-MMBs，室温旋转孵育15min，清洗，用10μLPBS重悬HRPTdT-AptCP-MMBs，得到重悬液；（6）对磁式玻碳电极MGCE进行预处理，然后依次在无水乙醇和超纯水中各超声1min以除去残留的Al2O3粉末及其他杂质；接着，将步骤（5）所得的重悬液滴加到预处理后的磁式玻碳电极表面，形成用于中药材中赭曲霉毒素A检测的电化学适配体传感器。

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