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一种黄曲霉在物种水平的鉴定方法及应用 

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申请/专利权人:中国医学科学院药用植物研究所

摘要:本发明公开了一种黄曲霉在物种水平的鉴定方法及应用。属于真菌物种鉴定技术领域。本发明方法筛选得到了黄曲霉物种特异靶标序列。本发明方法为黄曲霉构建了包含超过四百万个候选靶标序列库,选择的特异靶标序列具有种内高保守、种间特异性的特点,能够用于广泛物种、曲霉属近缘物种的物种水平的准确鉴定。本发明充分考虑种内变异的影响,优化了生信分析策略和流程,使分析结果能够在广泛物种范围内适用,而不仅限于分析范围内的物种鉴定,具有更广阔的应用前景。同时,测序作为序列识别的金标准,不仅证明了每条特异靶标序列在黄曲霉种内的保守性,同时与近缘物种米曲霉同源序列的差异也证明了序列的特异性。

主权项:1.一种黄曲霉在物种水平的鉴定方法,其特征在于,包括如下步骤:1基因组获取自NCBI数据库下载黄曲霉、烟曲霉、米曲霉、寄生曲霉的基因组;2黄曲霉全基因组筛选基于最大似然法对黄曲霉株系的基因组进行建树,外部类群分别选择烟曲霉、米曲霉和寄生曲霉,以此过滤有潜在错误或不可靠的黄曲霉基因组;3黄曲霉全基因组分析将最终筛选的黄曲霉基因组均分解为25bp的片段,提取所有包含PAM序列的片段,即候选靶标序列;4黄曲霉属内特异候选靶标序列筛选将所述候选靶标序列与曲霉属其他76个物种的全基因组进行比对,选择与其他序列至少有三个核苷酸差异的序列,即属内特异候选靶标序列;5黄曲霉特异候选靶标序列库构建将所述属内特异候选靶标序列与米曲霉10个标准株系的基因组进行比较分析,选择与米曲霉中的同源序列至少存在三个核苷酸差异的序列,即特异候选靶标序列;6从所述特异候选靶标序列中选择出现频率高、且NCBI的BLAST结果特异性好的序列作为特异靶标序列;7基于所述特异靶标序列设计引物对,提取待检测样品的基因组DNA并使用所述引物对进行扩增,检测扩增产物中是否存在特异靶标序列,若存在,则待检测样品为黄曲霉。

全文数据:

权利要求:

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