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申请/专利权人：泰州博莱得利生物科技有限公司;中瑞动检(北京)生物技术有限公司

摘要：本发明公开了一种犬白蛋白、制备方法及其应用，其制备方法包括：以健康犬血清或血浆为原料，用阴离子交换层析柱UniGel‑80Q进行第一次层析分离得到犬白蛋白粗品；Ⅱ将犬白蛋白粗品用阴离子交换层析柱QBestaroseFF进行第二次层析分离得到纯化的犬白蛋白。再将所获得的全白蛋白作为免疫原，筛选获得其特异性纳米抗体。本发明在申请人早期研究的基础上进一步优化，能够最大限度的降低白蛋白活性的损失，显著提高犬白蛋白纯度和回收率，获得的产品可以直接用于抗体的制备和筛选，并获得了相应的纳米抗体，可以用于不同种属来源的白蛋白产品的检测。

主权项：1.一种犬白蛋白的制备方法，其特征在于所述制备方法包括如下步骤：1将健康犬血浆或血清融化，用10倍量pH值为5.0的0.03molL醋酸盐缓冲液进行稀释，并用1.0molL醋酸调pH值至5.0，过滤澄清；2将阴离子层析柱UniGel-80Q用pH值为5.0的0.03molL醋酸盐缓冲液平衡至出液pH值为5.0后，将稀释过滤后的血清或血浆样品上样；3上样结束后，用pH值为5.0的0.03molL醋酸盐缓冲液进行冲洗，直至A280吸收回到基线水平为止，然后用含0.4molLNaCl的0.03molL醋酸盐缓冲液pH6.8洗脱层析柱，此洗脱液Ⅰ即为犬白蛋白粗品；4将阴离子层析柱QBestaroseFF用pH值为7.0的0.03molL醋酸盐缓冲液平衡至出液pH值为7.0后，用NaOH调节洗脱液Ⅰ的pH至6.8，上样；5上样结束后，用pH值为7.0的0.03molL醋酸盐缓冲液充分洗涤，直到A280吸收至基线水平，然后用含0.1molLNaCl的0.03molL醋酸盐缓冲液pH7.0洗涤层析柱，以去除结合在阳离子柱上的杂蛋白，当A280吸收回到基线水平后，用含有0.4molLNaCl的0.03molL醋酸盐缓冲液pH7.0洗脱目标蛋白，收集蛋白峰，此洗脱液Ⅱ即为纯化后的犬白蛋白；6将收集的洗脱液Ⅱ，用截留率为20kDa的超滤膜超滤浓缩，直至蛋白浓度达到10％以上，然后在搅拌条件下缓慢加入辛酸钠，使每克蛋白辛酸钠含量为0.16mmol，0.5molL氢氧化钠溶液调节pH至7.0。7把透析后的白蛋白制品除菌过滤于无菌容器中，将白蛋白溶液加热至60℃保温10小时，使制品pH值为7.0，每克白蛋白辛酸钠含量为0.16mmol的条件下进行病毒灭活。8配制分装。

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