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申请/专利权人：天津科技大学
摘要：本发明公开了一种通过光交联短肽定向固定化酶的方法，属于酶工程技术领域。本发明选择蔗糖异构酶SI作为模型酶。利用分子模拟软件选择出远离活性位点的区域作为定向固定化区域，随后结合分子对接和分子动力学模拟方法设计与该区域有较高亲和性的光交联短肽，并在其末端引入含有光交联基团的非天然氨基酸4‑苯甲酰基‑L‑苯丙氨酸，序列命名为：VNIGGXVG。利用光交联短肽实现酶在树脂微球EP表面的定向固定。对光交联定向固定化酶进行酶活力、稳定性与重复使用性的评估。本发明赋予固定化酶良好的耐热性和可重复使用性。与传统的固定化酶相比，本发明结合定向吸附和光交联技术，提供了一种高效环保的定向固定化酶方法。
主权项：1.一种通过光交联短肽定向固定化酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：1远离酶的活性位点进行光交联短肽的设计；2将设计好的光交联短肽连接在载体表面；3酶溶液与2中得到的载体混合进行吸附反应；4将3中得到的混合物进行紫外光照处理，产物经沉淀，洗涤后得到光交联定向固定化酶；其中，所述酶为蔗糖异构酶；所述步骤1具体为：使用Gromacs和AutoDock软件对酶的三维结构进行模拟与光交联短肽设计，设计与蔗糖异构酶目标固定区域具有高亲和力的短肽；所述光交联短肽的氨基酸序列为H2N-VNIGGX-COOH，其中，X为4-L-苯甲酰基苯丙氨酸；步骤2中，所述连接反应的缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液，浓度为10～100mM，pH为7.5～10.0；所述光交联短肽的质量为0.5～5mg，溶解于所述缓冲溶液中；所述载体为环氧树脂，树脂表面环氧基团与短肽的摩尔质量比为5～50；步骤3中，所述吸附反应的缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液，浓度为10～100mM，pH为5.0～6.5；所述酶溶液的初始浓度为0.5～10mgmL，载体的质量为5～20mg；所述步骤4中的紫外光照波长为350～365nm。
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权利要求：
百度查询： 天津科技大学 一种通过光交联短肽定向固定化酶的方法
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