买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：天津大学

摘要：本发明涉及一种工程改造希瓦氏菌囊泡提高胞外电子传递的方法；筛选细胞壁完整性或细胞形态维持相关的目的基因mrdB、mreB、murE、pbpC；针对每个基因设计6个靶向sgRNA，通过Goldengate组装包含sgRNA和dCas9重组质粒；将重组质粒导入希瓦氏菌中，得到24个工程菌株；诱导工程菌的CRISPR‑dCas9转录抑制系统表达，扫描电子显微镜观察囊泡的数量选出每个基因最高效sgRNA对应的工程菌株；将4株工程菌株进行电化学表征，通过诱导CRISPR‑dCas9系统表达促进囊泡分泌，提高其胞外电子传递能力。本发明为改造电活性微生物、促进工业应用提供了新思路。

主权项：1.一种工程改造希瓦氏菌囊泡提高胞外电子传递的方法；其特征是：包括如下步骤：1筛选模式产电微生物希瓦氏菌ShewanellaoneidensisMR-1基因组上有利于囊泡分泌的相关基因，得到维持细胞形态的基因mrdB；基因mrdB的序列为SEQIDNO.1；2针对目的基因mrdB分别设计构建6个靶向sgRNA及其上、下游引物；3通过Goldengate技术分别将不同的sgRNA序列整合到具有dCas9蛋白、IPTG诱导型Ptac启动子和卡那抗生素抗性的原始基础质粒pHG11-dCas9上，得到6个包含sgRNA和dCas9的重组质粒；步骤3涉及的原始基础质粒pHG11-dCas9的序列为SEQIDNO.5；4将步骤3构建的6个重组质粒分别热激化转至2,6-二氨基庚二酸DAP营养缺陷型大肠杆菌感受态WM3064中并抗性筛选；5将步骤4抗性筛选得到的含有重组质粒的大肠杆菌WM3064与野生希瓦氏菌MR-1进行接合转移，将大肠杆菌中的重组质粒导入野生希瓦氏菌MR-1中，构建6株工程希瓦氏菌株；6诱导步骤5构建的6株工程希瓦氏菌株CRISPR-dCas9系统的表达，对每个目的基因进行转录抑制，并通过扫描电子显微镜观察囊泡的数量，筛选出目的基因的最高效sgRNA对应的工程菌株；所述工程菌株含有的重组质粒序列为SEQIDNO.6；7基于步骤6筛选得到的工程菌株的二级发酵液和铁氰化钾溶液，分别构建双室微生物燃料电池并进行电化学表征，通过诱导CRISPR-dCas9系统表达，对靶基因的转录抑制从而促进囊泡分泌，提高其胞外电子传递能力。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 天津大学 一种工程改造希瓦氏菌囊泡提高胞外电子传递的方法