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申请/专利权人：广州先进技术研究所
摘要：本发明提供的高纯度芽孢菌片制备方法包括如下步骤：步骤1、制备产芽孢琼脂培养基；步骤2、制备种子菌液，然后将其接种于产芽孢琼脂平板培养基，随后置于恒温培养箱中进行两阶段变温培养，洗脱离心后得到未纯化的芽孢沉淀；未纯化的芽孢沉淀再经过低温离心处理和离心脱水，获得无水高纯度芽孢；步骤3、将无水高纯度芽孢制备成备高纯度芽孢菌片。本发明提供的芽孢菌片制备方法的成本价格仅为2～3元片，制备时间短，大幅降低了测试成本和费用。此外，本发明制备的芽孢菌片具有纯度高、负载量准确及室温储存一个月不变性等优点，可对消毒器械灭菌效果进行准确评价，并且回收率高，可进一步提高芽孢菌片的评价实用性。
主权项：1.一种高纯度芽孢菌片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、制备产芽孢琼脂培养基；步骤2、高纯度芽孢的快速制备和纯化：步骤2.1、将活化后的B.subtilisATCC9372划线于LB琼脂培养基中，37℃恒温过夜培养至产生单菌落；挑取单菌落接种于LB液体培养基，培养至对数期获得种子菌液，种子菌液的菌体浓度为1x106～5x108CFUmL；步骤2.2、将种子菌液接种于产芽孢琼脂平板培养基，涂布均匀；将接种后的产芽孢琼脂平板培养基置于恒温培养箱中进行两阶段变温培养，第一阶段37℃培养10～18h，第二阶段50～70℃培养12～24h；两阶段变温培养后，向产芽孢的琼脂平板培养基中加入PBS缓冲液反复冲洗菌落，然后将洗净后的菌落收集后离心，得到未纯化的芽孢沉淀；步骤2.3、将未纯化的芽孢沉淀用无菌水制备成芽孢悬液进行低温离心处理，得到湿润芽孢沉淀；依次用不同浓度的乙醇对所述湿润芽孢沉淀进行离心脱水，倒出上清后，待离心管内乙醇自然挥发后，即获得无水高纯度芽孢；步骤3、制备高纯度芽孢菌片：采用无菌水充分溶解无水高纯度芽孢，配置悬液吸光度为0.15～1.55的芽孢悬液，吸取芽孢悬液均匀涂布于菌片载体上，随后进行真空冷冻干燥即得。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广州先进技术研究所 一种高纯度芽孢菌片及其制备方法和应用
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