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申请/专利权人：乌鲁木齐海关技术中心
摘要：本发明属于农业和植物检疫领域，具体涉及一种基于3D‑dPCR检测向日葵茎溃疡病的方法，包括以下步骤：S1提取茎溃疡病菌DNA；S2提取向日葵样品DNA；S3人工模拟带菌向日葵种子；S4合成引物探针：选择DH‑FDH‑R为引物、DH‑Pr为探针合成；所述DH‑F核酸序列为：5′‑CGCTTATCTCTTACACCAAAACCCT‑3′；所述DH‑R核酸序列为：5′‑GCAGCTATTGAAACAGCTCATCTG‑3′；所述DH‑Pr核酸序列为：5′‑ATGCACCCACCGCACTCCTGC‑3′；S5构建目的基因质粒；S63D‑dPCR反应。该方法基于3D‑dPCR检测技术，通过改变实验条件，大大降低了向日葵茎溃疡病菌的检测限，在海关等检测场景中具有很强的使用价值。
主权项：1.一种基于3D-dPCR检测向日葵茎溃疡病菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1提取茎溃疡病菌DNA：将茎溃疡病菌菌株培养，选取纯化的单菌落菌块，提取其植物基因组DNA，测量DNA浓度和纯度后保存备用；S2提取向日葵样品DNA：取向日葵样品，研磨成粉后使用植物基因组DNA提取试剂盒进行提取植物基因组DNA，测量DNA浓度和纯度后保存备用；S3人工模拟带菌向日葵种子：取向日葵样品漂洗消毒后置于纯化好的向日葵茎溃疡菌中，培养至带有目的菌丝的种子后保存；S4合成引物探针：选择DH-FDH-R为引物、DH-Pr为探针合成；所述DH-F核酸序列为：5′-CGCTTATCTCTTACACCAAAACCCT-3′；所述DH-R核酸序列为：5′-GCAGCTATTGAAACAGCTCATCTG-3′；所述DH-Pr核酸序列为：5′-ATGCACCCACCGCACTCCTGC-3′；S5构建目的基因质粒：选取目的核酸序列，合成质粒重组菌，将质粒重组菌活化培养后提取目的基因质粒；S63D-dPCR反应：以目的基因质粒DNA为模板，进行3D-dPCR扩增反应。
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权利要求：
百度查询： 乌鲁木齐海关技术中心 一种基于3D-dPCR检测向日葵茎溃疡病菌的方法
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