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申请/专利权人：山东盛铭医疗科技有限公司
摘要：本发明公开了黄连外泌体的制备方法及其在制备抗溃疡性结肠炎药物中的用途，属于医药技术领域。本发明将黄连酶解后，差速离心，超高速离心，蔗糖梯度离心，膜过滤处理得到所述黄连外泌体。实验证实本发明制备方法得到的黄连外泌体能够显著增加溃疡性结肠炎模型小鼠体重，显著降低便血指数和稀便指数，增加结肠长度，达到治疗溃疡性结肠炎的目的。本发明为溃疡性结肠炎的防治提供了新的治疗途径。
主权项：1.一种黄连外泌体的制备方法，其特征在于，所述黄连外泌体的制备方法包括以下步骤：S1、黄连清洗，低温干燥，粉碎，粉碎后的粉末与PBS缓冲液混合，加入复合酶进行酶解反应，获得酶解液；所述复合酶为纤维素酶45wt％、果胶酶20wt％、半纤维素酶15wt％、木质素酶10wt％和壁蛋白酶10wt％；S2、对步骤S1所得酶解液进行差速离心，离心力为1000g的条件下离心10min，离心力为3000g的条件下离心30min，离心力为10000g的条件下离心50min；差速离心后取上清液，弃沉淀，将上清夜进行超高速离心，离心力为13000g的条件下离心120min，取沉淀，悬浮于预冷的PBS缓冲液中，得到沉淀悬液；S3、在离心管中依照梯度加好蔗糖溶液，蔗糖浓度梯度为8%、30%、45%、60%，在最上层加入步骤S2所得沉淀悬液，于离心力为13000g的条件下离心120min；离心结束后分别收集各分层到离心管，加入预冷的PBS缓冲液后混匀，于13000g离心120min，去蔗糖，得到沉淀；S4、用预冷的PBS缓冲液重悬S3所得的沉淀，使用一次性注射器吸取重悬后的液体，缓慢滴至规格为0.22μm的细胞滤膜进行过滤，将过滤后的溶液使用低温离心机进行4℃，离心力为130000g的条件下离心120min,离心完毕后吸上清保留沉淀，使用PBS缓冲液将所得沉淀重悬，即为所提取分离的黄连外泌体。
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权利要求：
百度查询： 山东盛铭医疗科技有限公司 黄连外泌体的制备方法及其在制备抗溃疡性结肠炎药物中的用途
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