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申请/专利权人：西北农林科技大学
摘要：本发明涉及黄瓜育种技术领域，尤其涉及一种黄瓜矮生突变候选基因的精细定位和克隆方法。首先对野生型和突变体的株高表型进行比较，再对野生型和突变株幼苗的节间进行细胞学观察，并进行基因精细定位和候选基因的克隆。本发明通过构建的F2分离群体对矮生基因进行精细定位和候选基因克隆，明确了调控矮生突变的基因。
主权项：1.一种黄瓜矮生突变候选基因的精细定位和克隆方法，其特征在于，步骤为：步骤1：在黄瓜EMS诱变的M2代突变体株系中选出明显矮生的单株，对选留的单株编号并自交留种；按照株系种植，观察矮生单株自交后代的株高分离情况，继续单株编号、筛选并自交留种，观察植株矮生表型性状不再分离为止；步骤2：在成株期观察植株株高、节间长度明显短缩的突变体，被确定为矮生突变体；步骤3：将步骤2中确定的突变体植株命名为cp-3，将cp-3突变体和野生型No.26种植在光照培养箱中，三叶一心期分别选取野生型与突变体植株的第二节间组织，进行细胞学观察；步骤4：明确暗培养对种子下胚轴伸长的影响；步骤5：分别构建cp-3×No.26及cp-3×Gy14的F1、BC1、BC2及F2分离群体，并在田间种植亲本、F1、BC1、BC2及F2群体进行蔓生与矮生，株高分离规律的观察，并用卡方χ2进行显著性分析；步骤6：利用Joinmap4软件构建遗传连锁图谱；步骤7：基于突变体基因组重测序结构设计Indel引物，利用BSA法对确定具有多态性的Indel引物并用于连锁图谱的建立，确定侧翼标记；步骤8：扩大F2群体至1424株群体，利用步骤7确定的侧翼标记进行基因分型，挑选重组单株的个体，并继续新开发的多态性Indel引物对，通过其确定重组单株进行基因分型，统计条带，缩小矮生基因的定位区间；步骤9：在葫芦科基因组数据库中查找最终定位区间内所有候选基因的相关信息，包括基因片段大小，注释和功能等；在葫芦科基因组数据库中进行候选基因的预测，在野生型和突变体中进行基因全长的扩增，然后测序进行基因序列比对，明确矮生突变体cp-3和野生型No.26候选基因的序列差异。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 西北农林科技大学 一种黄瓜矮生突变候选基因的精细定位和克隆方法
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