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申请/专利权人：山西省农业科学院棉花研究所

摘要：本发明公开了一种双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法。它采用具有1～2片真叶的砧木仅保留2片子叶或具有4～6片真叶的砧木保留2片子叶和1～2片真叶，从子叶真叶叶柄下缘开始，沿茎中轴将茎杆和叶柄下缘从中间纵向劈开；接穗切口削成“V”字型；接穗的茎垂直插入砧木切口。砧木的切口同时穿过叶柄下段和茎中轴，便于接穗的固定，接穗和砧木自然密切结合，叶片光合作用的营养物质可通过叶柄就近输送入接穗中，促进接口迅速愈合。结合缓苗期保湿保温，嫁接成活率可稳定在98％以上，在适宜的砧木与接穗配合期嫁接成活率可达到100％，该方法操作简便、嫁接速度快、成活率高。

主权项：1.双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，包括以下步骤：Step1：对于生长有1～2片真叶的砧木，仅保留砧木2片子叶，切去2片子叶以上部位的茎叶，对于生长有4～6片真叶的砧木，保留砧木2片子叶和1～2片真叶，切去上部的茎叶，然后从子叶叶柄真叶叶柄下缘的5mm处开始，沿茎中轴将茎杆和叶柄下缘从中间纵向剖开，切口长1.5cm～2cm；Step2：保留接穗顶端2～4片幼嫩的真叶和生长点，长度3～5cm，在接穗的茎秆的下段两边各削1刀，削尖，削面呈“V”字型；Step3：将接穗的茎段垂直插入砧木切口中，砧木的叶柄会促使接穗和砧木的切口紧密结合，然后用绳将接穗和砧木缠绕固定；Step4：用塑料薄膜严密包裹整盆植株置于荫棚下；Step5：待嫁接植株渡过缓苗期，并且接穗叶片恢复平展并开始生长时，逐渐将包裹植株的塑料薄膜开口放风透气去湿，最后揭膜、去除固定物，即完成嫁接。

全文数据：双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法技术领域[0001]本发明涉及植物幼苗和幼嫩枝条的劈接方法，具体涉及双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，属于农业技术领域。背景技术[0002]基因工程和细胞工程是当今棉花遗传改良的重要手段，棉花组培再生植株是转基因技术在棉花遗传改良应用的基础，但通过体细胞胚胎发生获得的转基因再生棉株的试管苗根系大多发育不良，表现为无根苗、褐根苗和畸形苗如丛生苗等，根系正常的再生植株移栽至土壤或蛭石中，成活率极低通常只有10〜20%，生长缓慢，极大地限制了棉花遗传改良技术的应用。[0003]嫁接是一种无性杂交栽培技术，通常选择根系发达、抗病强的海岛棉作为砧木，将转基因再生棉株直接嫁接到生长旺盛的站木上，这样使姑木与接糖体内的营养物质进行交换，从而提高接穗的抗病性，增强其对外界环境的适应性，生长发育加快，提早成熟，极大地提尚其成活率。[0004]嫁接体系的建立和完善有利于大规模保存繁育遗传分离群体、常规棉株以及稀有种质资源，有利于加快现代生物技术在棉花遗传改良上的广泛应用、大大地加快转基因棉花的育种进程。[0005]据有关资料显示，一些研宄人员分别采用合接法、劈接法和插皮接法进行棉花嫁接，一定程度上提高了棉株的成活率。但是对于再生植株嫁接来说：[0006]1常规的“劈接法”贴着子叶柄摘头去心，切口垂直于子叶柄，子叶会因重力作用向两边耷拉，接穗插入固定较为困难。也有一些研宄人员在子叶柄上端留一段上胚轴，纵向剖开，然而此方法不便于砧木叶片供给接穗营养；_^[0007]2“插皮嫁接法”需要的砧木较大；[0008]3“合接法”其形成层接触面较少，砧木与接穗体内的营养物质交换较少。[0009]因此，有关棉花的嫁接技术仍有待深入系统研宄，完善的棉花嫁接技术体系也有待建立。发明内容[0010]本发明目的在于提供一种操作简便、可有效提高嫁接成活率的双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法。[0011]为了实现上述目标，本发明采用如下技术方案：[0012]双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，包括以下步骤：[0013]stepl:对于生长有1〜2片真叶的砧木，仅保留2片子叶，切去2片子叶以上部位的茎叶;对于生长有4〜6片真叶的砧木，保留砧木2片子叶和1〜2片真叶，切去上部的莲叶，然后从子叶叶柄真叶叶柄下缘的5mm处开始，沿莲中轴将莖杆和叶柄下缘从中间纵向剖开，切口长1.5〜2cm;[0014]Step2:保留接穗顶端2〜4片幼嫩的真叶和生长点，长度3〜5cm，在接穗茎秆下段两边各削1刀，削尖，削面呈“V”字型；[0015]Step3:将接穗的莲段垂直插入姑木切口中，姑木的叶柄会促使接穗和贴木的切口紧密结合，然后用绳将接穗和砧木缠绕固定；[0016]Step4:用塑料薄膜严密包裹整盆植株，置于荫棚下；[0017]Step5:待嫁接植株渡过缓苗期，并且接穗叶片恢复平展并开始生长时，逐渐将包裹植株的塑料薄膜开口放风透气去湿，最后揭膜、去除固定物，即完成嫁接。[0018]前述的双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，在Stepl中，前述砧木的品种为海岛棉、黑籽南瓜、印度南瓜或瓠葫芦。[0019]前述的双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，在Stepl中，前述切口长1.5cm。[0020]前述的双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，在Step3中，从砧木2片子叶柄与接穗的结合部开始至砧木的茎段，用塑料绳将接穗和砧木缠绕固定。[0021]前述的双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，在Step3中，用嫁接夹夹住切口部位，将接穗和砧木紧密结合在一起。[0022]前述的双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，在Step4中，控制环境湿度多80%，控制环境温度25〜28°C。[0023]本发明的有益之处在于：[0024]1砧木的切口同时穿过叶柄下段和茎的中轴，利用叶柄的固定作用可以很方便的固定接穗，接穗和砧木自然密切结合，叶片光合作用的营养物质可通过叶柄就近输送入接穗中，促进接口迅速愈合，整个嫁接操作简单，嫁接速度快，并且成活率高，经统计，采用本发明的方法嫁接植株时，成活率可达98%以上；[0025]2本发明的劈接方法不仅适用于转基因和组织培养再生棉株幼苗和幼嫩枝条的嫁接，还适用于其他许多双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的嫁接，例如黄瓜、甜瓜、西瓜和苹果幼苗等的嫁接，应用范围非常广泛。附图说明[0026]图1是砧木生长有1〜2片真叶）的切口的示意图；[0027]图2是接穗的切削面的示意图；[0028]图3是将接穗插入砧木的切口的示意图；[0029]图4是接穗和砧木的缠绕示意图；[0030]图5是砧木生长有4〜6片真叶）的切口的示意图；[0031]图6是将接穗插入砧木的切口的示意图。具体实施方式[0032]以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。[0033]实施例1、在生长有丨〜2片真叶的海岛棉上嫁接转基因再生棉花植株[0034]秋末、冬天和春季，温室温度较为合适，在温室直接嫁接，温室最适温度控制在28°c±rc;夏季和初秋温度较高，在50%的遮阳棚内嫁接。[0035]砧木:盆栽棉花栽培种海岛棉棉苗20盆，每盆5株，共100株，待子叶完全展开，移栽至直径20cm左右的塑料盆中，每盆一株，作为砧木。[0036]接穗:组培无菌转基因棉苗作为接穗。[0037]Stepl:在嫁接前一天，将种植在花盆中的海岛棉生长有1〜2片真叶且2片子叶完好的棉苗浇足水分，仅保留砧木2片子叶，用锋利的刀片贴着子叶柄切去2片子叶以上部位的茎叶，然后从子叶叶柄下缘的5mm处开始，沿茎中轴将茎秆和叶柄下缘从中间纵向剖开，切口利索平滑，切□长1.5cm，如图1所示。[0038]Step2:将棉花转基因再生植株的根部去掉得到接穗），保留接穗顶端2片幼嫩的真叶和生长点，将接穗长度控制在3〜5cm，去除下部多余茎叶和根，然后在接穗的茎秆的下段两边各削1刀，削尖，削面呈“V”字型，削面长度为1.5〜2cm，如图2所示。[0039]Step3:用大拇指和食指轻轻扭动砧木的切口部位，使得切口张开，将削好的接穗的茎段垂直向下插入砧木茎段的切口中，切口穿过叶柄与茎段（区别于已报道的将茎段直接劈开），如图3所示，叶柄具有固定作用，可以使接穗和砧木的切口自然紧密结合，便于绳子和嫁接夹的固定，进而可以使叶片光合产物能就近运输到切口，促进伤口愈合和接穗生长，显著提高成活率;接穗插好后，从砧木2片子叶柄与接穗的结合部位开始至砧木的茎段，用塑料绳斜着自下而上将接穗和砧木缠绕固定，然后再往下缠绕打结，如图4所示。[0040]Step4:取适当长度的铁丝2根，将这2根铁丝顶端十字交叉，两端插入花盆边缘形成25〜30cm左右的小拱形，用塑料薄膜严密包裹花盆和铁丝（即包裹整盆植株），周缘紧密绑扎保湿，置于荫棚下，防止接穗萎蔫，嫁接植株进入缓苗期，控制环境湿度多80%，同时控制环境温度28°C±1°C。[0041]Step5:待嫁接植株渡过缓苗期，接穗叶片恢复平展并开始生长，逐渐将包裹植株的塑料薄膜开口放风透气去湿，具体是:在嫁接后的第4〜7天，在薄膜顶端打一指头粗细的圆孔通气，以防接穗发霉，随后接穗长出1〜2片新叶，大约在嫁接后的第10〜12天揭膜，在嫁接后的第15天左右解绳，砧木与接穗接合处愈合，嫁接棉株全部成活，成活率达100%，一周后即可移栽至大田或大盆。[0042]砧木的切口同时穿过叶柄下段和茎的中轴，利用叶柄的固定作用可以很方便的固定接穗，接穗和砧木自然密切结合，叶片光合作用的营养物质可通过叶柄就近输送入接穗中，促进接口迅速愈合，整个嫁接操作简单，嫁接速度快，并且成活率高。[0043]经统计，采用本发明的方法在海岛棉上嫁接转基因再生棉花植株时，成活率达到了99-8%。[0044]实施例2、在生长有4〜6片真叶的海岛棉上嫁接转基因再生棉花植株[0045]砧木:盆栽棉花栽培种海岛棉棉苗2〇盆，每盆5株，共100株，待子叶完全展开，移栽至直径20cm左右的塑料盆中，每盆一株，作为砧木。[0046]接穗:培养室培养基中无菌转基因棉苗作为接穗。[0047]Stepl:在嫁接前一天，将种植在花盆中的海岛棉生长有4〜6片真叶的棉苗浇足水分，保留砧木的2片子叶和1〜2片真叶，用锋利的刀片切去上部的茎叶，然后从真叶叶柄下缘的5mm处开始，沿茎中轴将茎秆和叶柄下缘从中间纵向剖开，切口利索平滑，切口长1.5cm，如图5所不。[0048]Step2:将棉花转基因再生植株的根部去掉，保留接穗顶端2片幼嫩的真叶和生长点，将接穗长度控制在3〜5cm，去除下部多余茎叶和根，然后在接穗的茎杆的下段两边各削1刀，削尖，削面呈“V”字型，削面长度为1•5〜2cm，如图2所示。[0049]Step3:用大拇指和食指轻轻扭动砧木的切口部位，使得切口张开，将削好的接穗的茎段垂直向下插入砧木茎段的切口中，切口穿过叶柄与茎段，如图6所示;接穗插好后，从砧木真叶叶柄与接穗的结合部开始至砧木的茎段，用塑料绳斜着自下而上将接穗和砧木缠绕固定，然后再往下缠绕打结。[0050]Step4:取适当长度的铁丝2根，将这2根铁丝顶端十字交叉，两端插入花盆边缘形成25〜30cm左右的小拱形，用塑料薄膜严密包裹花盆和铁丝（即包裹整盆植株），周缘紧密绑扎保湿，置于荫棚下，防止接穗萎蔫，嫁接植株进入缓苗期，控制环境湿度彡80%，同时控制环境温度28°C±1°C。[0051]Step5:待嫁接植株渡过缓苗期，接穗叶片恢复平展并开始生长，逐渐将包裹植株的塑料薄膜开口放风透气去湿，具体是:在嫁接后的第4〜7天，在薄膜顶端打一指头粗细的圆孔通气，以防接穗发霉，随后接穗长出1〜2片新叶，大约在嫁接后的第1〇〜12天揭膜，在嫁接后的第15天左右解绳，砧木与接穗接合处愈合，嫁接棉株全部成活，成活率达1〇〇%，一周后即可移栽至大田或大盆。[0052]经统计，采用本发明的方法在海岛棉上嫁接转基因再生棉花植株时，成活率达到了99.5%〇[0053]生长有1〜6片真叶的海岛棉的棉苗均可做砧木，接穗为长出4〜5片真叶且茎段粗细均匀的组培苗时，此期是砧木与接穗配合的最佳苗龄期。经统计，采用此种组合方式，嫁接成活率可达100%。[0054]实施例3、在生长有1〜2片真叶的黑籽南瓜上嫁接黄瓜幼苗[0055]早春季节，分别在营养钵中播种盆栽黑籽南瓜和黄瓜各1〇〇盆，每盆2〜3株，待子叶完全展开，每盆留1株生长较为健壮的植株。[0056]砧木:南瓜苗长出1〜2片真叶，且第1片真叶长lcm长左右时，即可作为砧木。[0057]接穗:播种10天后，黄瓜苗子叶展平，长出1片真叶和生长点，即可作为接穗。[0058]Stepl:在嫁接的前一天，将种植在营养钵中的南瓜苗生长有1〜2片真叶且2片子叶完好的幼苗浇足水分，仅保留砧木2片子叶，用锋利的刀片贴着子叶柄切去2片子叶以上部位的茎叶，然后从子叶叶柄下缘的5mm处开始，沿茎中轴将茎秆和叶柄下缘从中间纵向剖开，切口利索平滑，切口长1.5cm左右。[0059]Step2:将子叶展平的黄瓜苗的根部去掉得到接穗），保留接穗顶端1片幼嫩的真叶和生长点，将接穗长度控制在3cm〜5cm，去除下部多余茎叶和根，然后在接穗的茎秆下段两边各削1刀，削尖，削面呈“V”字型，削面长度为1.5cm左右。[0060]Step3:用大拇指和食指轻轻扭动砧木的切口部位，使得切口张开，将削好的接穗的茎段垂直向下插入砧木茎段的切口中，切口穿过叶柄与茎段;接穗插好后，从砧木2片子叶柄与接穗的结合部开始至砧木的茎段，用塑料绳斜着自下而上将接穗和砧木缠绕固定，然后再往下缠绕打结。[0061]Step4:喷雾净水后，置于保湿小拱棚内。嫁接后3天内保持的湿度，白天温度25〜28°C，夜间I8〜2〇°C。4天后小通风，8天后可揭I吴炼苗。成活率达100%，25天左右进入三叶一心期可定植。[0062]经统计，采用本发明的方法在黑籽南瓜苗上嫁接黄瓜苗时，成活率达到了的.6%。[0063]实施例4、在印度南瓜上嫁接甜瓜幼苗[0064]分别在营养钵中播种盆栽印度南瓜笋瓜和甜瓜新玉美人各1〇〇盆，每盆2〜3株，置于温室大棚中。待子叶完全展开，每盆留1株生长较为健壮的植株。印度南瓜比甜瓜提前1周种植。[0065]砧木：印度南瓜苗长出1〜2片真叶，2片子叶充分展平，第1片真叶出展（即破心），苗高6〜8cm，茎未中空时，即可作为砧木。[0066]接穗:甜瓜子叶展平第一片真叶露头即破心后，即可作为接穗。[0067]Stepl:取砧木苗除去真叶和生长点，保留2片完好的子叶，用利刀从子叶叶柄下缘的5ram处开始，沿茎中轴将茎杆和叶柄下缘从中间纵向剖开，切口利索平滑，切口长1•5cm左右。[0068]Step2:取接穗苗，在子叶下1〜1.5cm处向下切削成双面楔形，楔苗长1〜1•5cm，楔面要与两子叶延长线垂直，以使砧木子叶能托住接穗苗。[0069]Step3:接穗的楔面插入砧木的切口里，要使接穗与砧木的表面平齐，然后用预先准备好的嫁接夹夹住接口，使接面紧密结合。[0070]St印4:置于保湿小拱棚内，遮阳网遮荫，3天后逐渐增加光照，通风透气，7天后解除绑缚固定物，全天见光。定植前7天左右，再降低温度炼苗，以便能适应定植后环境的条件。[0071]经统计，采用本发明的方法在印度南瓜苗上嫁接甜瓜新玉美人苗时，成活率达到了99.7%。[0072]实施例5、在瓠葫芦上嫁接西瓜幼嫩枝条[0073]分别在营养钵中播种盆栽瓠葫芦和西瓜夏宝各100盆，每盆2〜3株，置于温室大棚中。待子叶完全展开，每盆留1株生长较为健壮的植株。瓠葫芦先于西瓜提前10天播种，瓠葫芦的真叶出现时，即把顶芽摘除，生长最适温度25°C。[0074]砧木:瓠葫芦苗长出2〜3片真叶，2片子叶充分展平，即可作为砧木。[0075]接穗:西瓜子叶展平，第一片真叶露头即破心后，即可作为接穗。[0076]Stepl:取砧木苗除去真叶和生长点，保留2片完好的子叶，用利刀从子叶叶柄下缘的5ram处开始，沿茎中轴将茎秆和叶柄下缘从中间纵向剖开，切口利索平滑，切口长1.5cm左右，暂不拔除刀片。[0077]Step2:取接穗苗，在子叶下1〜1•5cm处向下切削成双面楔形，楔苗长1〜1.5cm，楔面要与两子叶延长线垂直，以使砧木子叶能托住接穗苗。[0078]Step3:拔除刀片，立即将削好的接穗的楔面插入砧木的切口里，要使接穗与砧木的表面平齐，然后用预先准备好的嫁接夹夹住接口，使接面紧密结合。[0079]Step4:置于保湿小拱棚内，遮阳网遮荫，棚室应密闭，室内相对湿度应保持在90%以上，室温保持24〜26°C。经过3〜5天逐渐增加见光的时间，10天后即可撤除遮光炼苗。嫁接后2〜3天尽量减少通风，每天只需换气1〜2次在早晨或傍晚）。[0080]经统计，采用本发明的方法在瓠萌芦苗上嫁接西瓜（夏宝）苗时，成活率达到了99.5%〇[0081]由此可见，本发明的劈接方法不仅适用于转基因（和组织培养再生棉株幼苗（和幼嫩枝条）的嫁接，还适用于其他许多双子叶植物幼苗朴糾和西瓜等的嫁接，应用范围非常广泛。[0082]需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。

权利要求：1.双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，包括以下步骤：Stepl:对于生长有1〜2片真叶的砧木，仅保留砧木2片子叶，切去2片子叶以上部位的茎叶，对于生长有4〜6片真叶的砧木，保留砧木2片子叶和1〜2片真叶，切去上部的茎叶，然后从子叶叶柄真叶叶柄下缘的5mm处开始，沿茎中轴将茎秆和叶柄下缘从中间纵向剖开，切口长1.5〜2cm;Step2:保留接穗顶端2〜4片幼嫩的真叶和生长点，长度3〜5cm，在接穗的茎杆的下段两边各削1刀，削尖，削面呈“V”字型；Step3:将接穗的茎段垂直插入砧木的切口中，砧木叶柄会促使接穗和砧木切口紧密结合，然后用绳将接穗和砧木缠绕固定；Step4:用塑料薄膜严密包裹整盆植株，置于荫棚下；Step5:待嫁接植株渡过缓苗期，并且接穗叶片恢复平展并开始生长时，逐渐将包裹植株的塑料薄膜开口放风透气去湿，最后揭膜、去除固定物，即^成嫁接。2.根据权利要求1所述的双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，在Stepl中，所述砧木的品种为海岛棉、黑籽南瓜、印度南瓜或瓢葫芦。3.根据权利要求1所述的双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，在Stepl中，所述切口长1.5cm。4.根据权利要求1所述的双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，在Step3中，从砧木2片子叶柄与接穗的结合部开始至砧木的茎段，用塑料绳将接穗和砧木缠绕固定。_5.根据权利要求1所述的双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，在Step3中，用嫁接夹夹住切口部位，将接穗和砧木紧密结合在一起。6.根据权利要求1所述的双子叶植物幼苗和幼嫩枝条的高效劈接方法，其特征在于，在St印4中，控制环境湿度彡80%，控制环境温度25〜28°C。

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